[求救] 免疫螢光的步驟

看板Biotech (生命科學)作者 (藍)時間15年前 (2010/12/20 23:33), 編輯推噓2(2010)
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目前我在做血色素的螢光反應 我的一抗是rabbit 二抗是goat的 想請問大家一抗二抗的濃度大家一般都是怎麼配的呢? 還有BSA做blocking,我看精華區BSA溶液約在2-5% 不過我是買粉狀的BSA 想請問2-5%是怎樣的算法? 另外我看在做抗體反應時 有些是寫放在室溫 有些則寫放在約37度 我想抗體是動物血清中萃取出的 是否放在溫度較近於體溫的溫度活性會比較高呢? 然後用PBS沖洗完應該要怎麼用乾呢?用氮氣吹還是用無塵紙吸乾呢? 還有曝光時間有比較推薦的嗎? 不好意思 因為不是生物相關科系 所以可能問得比較基本 不過我查資料蠻多版本的 所以想來請教看看 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.177.186

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blocking solution:2% goat serum+2% BSA,就秤你要體
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積X 0.02=克數嚕! 反應我都是在4度O/N,PBS用試鏡紙
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吸掉邊邊的水就好,拍照曝光是1.5s(Alexa488)
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不好意思,O/N是一抗,二抗是3小時室溫
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我想有兩個概念原PO比較不知道的...
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1. 染色過程到結束都不能讓樣品"乾掉" 以免破壞蛋白質
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所以任何沖洗過程作用只是在稀釋沖淡
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2. 一般建議抗體作用是4 度0/N 或室溫作用
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曝光時間則是隨鏡頭倍數不同 汞燈強弱 抗體作用程度而異
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並不一定 0.5秒到十秒都可能 最好有確定染得到的東西
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也就是positive control 才能斷定到底有沒有染到
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原po實驗室沒有詳細protocol可以看嘛?
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文章代碼(AID): #1D3tS_Pt (Biotech)
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