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Re: [求救] ligation 的正接反接

看板Biotech (生命科學)作者 (ganbaol)時間15年前 (2011/03/23 20:30), 編輯推噓7(7推 0噓 11→)
留言18則, 10人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
以前聽老師說過 不管你用 heatshock 或者是 Electroporation 將接好的 plasmid 送進細菌 都有機會送入多個 plasmid (如同你說的有正反接情況) 但是隨著代數的增加 複製到最後 只會剩下一 "種" 喔 Q Q 至於為什麼就不知道了 但可以知道的是, 挑單一的 colony 就只會有同一 "種" plamid 但多個 copy number的情況出現這樣... ※ 引述《rickkao11 (rickkao11)》之銘言： : 請問一下大家ligation 的問題 : 我的insert用EcoR1切一刀，vector也是一樣處理 : 在ligation時,有可能出現正接會反接的情況 : 後來進行transformation，是不是會出現同一個E.coli中同時有正接和反接的plasmid ? : 請問大家要如何處理這個問題 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.42.79.149
推
03/23 20:37, , 1F
質體不相容 具同樣Ori的plasmid只會留下一個
03/23 20:37, 1F
推
03/23 21:00, , 2F
謝謝您的回答
03/23 21:00, 2F
→
03/24 00:47, , 3F
老實說, 我又想問質體不相容的原因是啥?
03/24 00:47, 3F
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03/24 00:54, , 4F
google一下plasmid incompatibility就可以了
03/24 00:54, 4F
推
03/24 01:27, , 5F
恩 有看到了 謝謝樓上
03/24 01:27, 5F
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03/24 02:11, , 6F
應該不一定剩一個，跟plasmid可容許的copy number也有關吧
03/24 02:11, 6F
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03/24 02:23, , 7F
回錯方向..... = = 只會剩一種沒錯
03/24 02:23, 7F
推
03/24 13:20, , 8F
會剩一種，但不是剩一個
03/24 13:20, 8F
推
03/24 13:25, , 9F
1樓正解~
03/24 13:25, 9F
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03/24 14:28, , 10F
對 是剩一"種" = = sorry用字不當
03/24 14:28, 10F
※ 編輯: ganbaol 來自: 120.126.57.51 (03/24 18:16)
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03/24 18:18, , 11F
用種比較合理沒錯 XD 感謝大大的補充~
03/24 18:18, 11F
推
03/24 23:00, , 12F
後來想一想，但都是同一種VECTOR，細菌區分的出來insert
03/24 23:00, 12F
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03/24 23:00, , 13F
正接反接的差異嗎？長度都一樣啊
03/24 23:00, 13F
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03/26 23:43, , 14F
對細菌它需要是抗生素Re, 正/反接對它生長影響不大吧?
03/26 23:43, 14F
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03/26 23:44, , 15F
如果是人要看就設計primer定序便知道啦
03/26 23:44, 15F
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03/26 23:45, , 16F
把定序結果去NCBI BLAST align一下
03/26 23:45, 16F
推
03/26 23:47, , 17F
看是Plus還是minus
03/26 23:47, 17F
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04/03 00:14, , 18F
答案請看GENE IV 我懶的查了 反正就是會有排斥現象
04/03 00:14, 18F
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