[求救] RNA PCR

看板Biotech (生命科學)作者 (找愛 小護士)時間15年前 (2011/04/24 10:54), 編輯推噓7(7016)
留言23則, 10人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
各位前輩們 因為最近剛開始做有關RNA的實驗, 我抽完RNA轉Cdna後接著做PCR 但一直沒有PCR產物產生 我想請問 是否為我的PRIMER有問題 當初設計PCR PRIMER的時候 是利用ncbi中目標基因的 mRAN進行設計 還是需要利用目標基因的dna進行設計/// 謝謝大家的幫忙了!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.160.148.64

04/24 11:02, , 1F
你有p個GAPDH或是actin當internal control嘛?
04/24 11:02, 1F

04/24 11:11, , 2F
沒有ㄟ~~因為學姊說不用 因為我們不是要做rt-pcr
04/24 11:11, 2F

04/24 11:13, , 3F
我想問樓上的前輩 我用rna作設計primer的基因序列 這樣對嗎
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04/24 12:42, , 4F
所以你是從一堆cDNA裡面P出其中一種你想到的DNA嗎?
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04/24 15:22, , 5F
有無確認cDNA轉成功?
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04/24 19:40, , 6F
是阿!我就是要在一堆cDNA中,利用PCR增幅出我要的片段!!
04/24 19:40, 6F

04/24 19:42, , 7F
請問前備我要如何知道cDNA是否有轉成功?跑DNA膠嗎??
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04/24 20:38, , 8F
我覺得p個GAPDH看看有沒有product就可以知道了
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04/24 21:59, , 9F
叫管家出來面對不就知道了 :)
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04/24 23:39, , 10F
原po,RNA轉cDNA就是RT-PCR,你怎麼會說你不是作RT-PCR?!
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04/25 00:05, , 11F
應該是要cloning,所以才不需看GAPDH internal control,但是
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04/25 00:06, , 12F
還是要找些control確認你的cDNA quality
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04/25 00:15, , 13F
我想原po可能是把rt想成realtime了。
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你有找CDS嗎 感覺primer有問題
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04/25 05:23, , 15F
耍笨了 依據的序列是mRNA 應該是沒差
04/25 05:23, 15F

04/25 07:24, , 16F
樓上~如果是要cloning,你說找CDS沒錯,因為mRNA有5'/3'UTR
04/25 07:24, 16F

04/25 13:56, , 17F
這個實驗有兩個變數,1>primer是否可用? 2>cDNA quality
04/25 13:56, 17F

04/25 13:58, , 18F
需要個別用不同的實驗先測試過 才能回答你想問的問題
04/25 13:58, 18F

04/25 13:59, , 19F
我也覺得原po應該是要cloning
04/25 13:59, 19F

04/26 04:25, , 20F
說實話..看你用字的大小寫與推文..基礎知識有待加強
04/26 04:25, 20F

04/26 04:28, , 21F
看懂所有的原理..列出所有的protocol與操作細節..
04/26 04:28, 21F

04/26 04:31, , 22F
這邊的板友才有辦法幫你做troubleshooting...
04/26 04:31, 22F

04/29 21:03, , 23F
謝謝各位的幫忙,問題已經解決了!
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