[求救] 急問冷凍切片

看板Biotech (生命科學)作者 (日子過的真快阿)時間14年前 (2011/08/09 11:52), 編輯推噓2(207)
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想請問一下常常作冷凍切片的高手們 最近在作老鼠腦的切片 作完perfusion後,以4%PFA固定overnight 接著用30%蔗糖溶液脫水overnight 然後以刀片切取所要的部位作OCT包埋 包埋溫度為室溫30min,接著放到乾冰堆裡冷凍 隔天就切片,切片溫度-20到-12間 切的時後發現組織本身沒有皺摺 但是組織外有很多皺摺 導致貼片組織看起來有不少皺摺 想請問大家該怎麼改善這種問題 謝謝~~發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.125.206

08/09 13:41, , 1F
有點看不懂你的問題~不過你的溫度似乎偏高~我是用-25度
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08/09 13:50, , 2F
-20~-12 溫度 range 太大了吧, 差一度就可以
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讓你天堂地獄勒...
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08/09 16:19, , 4F
溫度太高過刀的時候片子會皺,應該是連sample的位置都皺了
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08/09 16:20, , 5F
另外,如果切取組織很大塊,30minOCT會不會有點太短?
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08/12 14:11, , 6F
切Brain的溫度大概落在-20~-25之間應該都還好,我是用-23度
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再來你放乾冰堆裡隔天乾冰有化掉嗎?乾冰的溫度不好控制
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08/12 14:15, , 8F
我用cryostat的話brain包埋完會丟到-20度冰箱O/N
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08/12 14:16, , 9F
另外你貼片的時候片子有沒有攤開?有時候切完片子會捲起來
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文章代碼(AID): #1EGAyMKx (Biotech)
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