[問題] real-time pcr
新手上路看了一下原理想問
real-time PCR只要看melting curve就可知道P出來的產物有沒有單一
為什麼不用再跑膠確認長度呢?
難道不會有單一melting curve 但卻P出不是預期的產物嗎???
(如primer夾出來的單一產物 長度(序列)不是我們要的)
還有real-time PCR的好處
是不是就只在於可以隨時監測PCR產物量的多寡
還是還有其他的好處@@?
像一般PCR
直接訂個30 cycle之類 丟在那邊就跑去做其他事
得到的結果不是一樣嗎?
反正PCR不是只是要放大片段 確認此序列的存在???
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
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08/10 23:49, , 1F
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呃... 學長說real time都是用量化數據來判斷@@
像是melting curve 所以不跑電泳
但不解的是不跑電泳怎麼知道擴出來的長度符合期望呢?
(結果他也不知道 就說反正看melting curve有單一產物就好)
像一般的PCR不都是跑出來長度以後 再拿去定序
推
08/11 00:27, , 2F
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對 我的意思是 目的是要放大片段
有必要隨時監控產量嗎?
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08/11 08:25, , 3F
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原來如此 就是說有些實驗定量很重要...感謝解答~
推
08/11 09:58, , 6F
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所以realtime也是跟普通PCR一樣 無法確認產物內容@@?
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嗯 所以就是注重在過程
但最後不用確認序列(定序)嗎@.@?
就好像我們用普通的PCR 有時候雖然跑出預期長度
但最後送去定序結果沒夾到預期的序列
※ 編輯: shienn 來自: 140.112.52.225 (08/11 16:34)
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