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[求救] 養BL21的問題?

看板Biotech (生命科學)作者 (howard)時間14年前 (2011/09/02 11:04), 編輯推噓6(6推 0噓 14→)
留言20則, 9人參與, 最新討論串1/1
各位大大 小弟是跨領域的學生 從來沒有養過e.coli @@ 在養菌上遇到一些問題 以下是我目前養菌的方法 不知道是否正確 請各位幫我看一下 是否邊有問題需要修正 5ml LB + 1ml BL21(有Amp抗性) + 6ul Amp(1ul/ml) 放在37度培養 overnight(14-16小時?) 加入6ml 100% glycerol(最終為50%) 分裝到eppendorft 放於負80度保存 關於overnigt有爬文到說不能培養太久 不然Amp會沒用? 所以14-16小時OK嗎? 如果要爆量的話可以培養多久再分管保存? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.131.166
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09/02 13:01, , 1F
可以濃縮之後保存阿~ 養好的菌液6000rpm離心
09/02 13:01, 1F
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09/02 13:02, , 2F
再看你要回溶多少 最後再加glycerol凍菌
09/02 13:02, 2F
推
09/02 13:33, , 3F
基本上凍菌不需要那麼多 凍個1ml起來就很夠了
09/02 13:33, 3F
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09/02 13:51, , 4F
5mlLB+1mlBL21,如果BL21有濁度,2小時就爆了,不用overnight
09/02 13:51, 4F
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09/02 15:57, , 5F
amp濃度這麼低? 才0.1ug/ml 我至少用100ug/ml
09/02 15:57, 5F
推
09/02 18:53, , 6F
原文Amp的濃度我看不懂...總之Amp的最終濃度要100ug/ml
09/02 18:53, 6F
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09/02 18:54, , 7F
還有，你的1ml BL21是從哪裡來的？ OD600多少？
09/02 18:54, 7F
推
09/02 21:18, , 8F
amp 濃度多少? 一般做法是LB配大瓶+amp放4度 要養再取
09/02 21:18, 8F
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09/02 21:19, , 9F
Amp一般50ug/ml即可 有些人會用100ug/ml
09/02 21:19, 9F
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09/02 21:20, , 10F
養出來後plasmid要check一下再凍 萬一不是就是做白工
09/02 21:20, 10F
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09/02 21:22, , 11F
從你1ul/ml的加法 我推估你的stock應該是50-100mg/ml
09/02 21:22, 11F
推
09/03 22:26, , 12F
細菌這種東西... 沾一滴就夠了 還有養太滿細菌會死掉
09/03 22:26, 12F
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09/03 22:30, , 13F
5ml沾一滴菌液 隔夜就會全滿 加1ml太暴力@@
09/03 22:30, 13F
推
09/04 00:03, , 14F
你的稀釋菌液太濃了，帶Amp的菌會被競爭掉
09/04 00:03, 14F
推
09/04 00:06, , 15F
建議你可以做50X稀釋，搖12hr，Amp濃一點(1~200ug/ml
09/04 00:06, 15F
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09/05 10:20, , 16F
謝謝各位的意見 我來try 看看@@
09/05 10:20, 16F
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09/05 14:08, , 17F
我剛剛去check了我用的amp濃度，實驗室配好的是
09/05 14:08, 17F
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09/05 14:10, , 18F
所以只用1ul的amp 濃度就有100ug/ml了
09/05 14:10, 18F
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09/05 14:11, , 19F
配好的amp濃度100mg/ml
09/05 14:11, 19F
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09/05 14:36, , 20F
想問Y大 回溶pellet一樣是用LB去溶 離心溫度是室溫?
09/05 14:36, 20F
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