[求救] ELISA二抗跟著一抗跑?!

看板Biotech (生命科學)作者 (心不透澈不會懂多難得)時間14年前 (2011/09/07 14:33), 編輯推噓2(206)
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有個問題想請問大家 最近在嘗試做ELISA的抗原盤 在測試時 發現沒有coating抗原的排數 結果竟然跟有coating抗原的差不多 都是跟著一抗血清的稀釋倍數在跑 就是血清稀釋倍數越低的 O.D值就越高 這是怎麼回事?? 明明沒有加抗源耶 一抗是用豬血清(10-70倍稀釋) 二抗是山羊抗豬+HRP(30000倍稀釋) 我都是用1%PBST來清洗五次 是洗不乾淨嗎?? 想請問還有什麼其他可能的原因?? 感謝大家!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.75.203.167

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沒有blocking
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09/07 22:47, , 2F
抱歉 忘了打~blocking用0.5% skim milk
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一般不是用BSA blocking嗎 至少我們實驗室是這樣
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blocking方法很多, milk, BSA, gelatin都是常用的
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簡單一點就試試不同的blocking reagent 拉長blocking時間
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增加二抗稀釋倍數,縮短二抗反應時間,wash次數&強度增加等
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麻煩就是換抗體或是換盤子了 有可能你的抗體去跟誰反應了
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感謝感謝!! 現在正在嘗試安佳脫脂奶粉 哈~
09/09 09:13, 8F
文章代碼(AID): #1EPn13qs (Biotech)
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