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[求救] Realtime PCR

看板Biotech (生命科學)作者 (balance)時間14年前 (2011/09/07 15:41), 編輯推噓3(3推 0噓 13→)
留言16則, 4人參與, 最新討論串1/1
新手第一次發問 最近在做一批microRNA的實驗 先從血清將microRNA用trizol LS抽出後 用nanodrop測出OD值 稀釋到固定濃度後 轉RT 轉完RT後用ABI stepone plus realtimePCR做相對定量 每個sample都有做 三重複 問題來了 同樣的檢體 分開轉RT後再定量CT值都差了3-4左右 請問是什麼原因造成呢??? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.125.33
推
09/07 15:45, , 1F
為什麼同樣的檢體要分開RT = =?
09/07 15:45, 1F
→
09/07 15:46, , 2F
而不是RT完後再分裝?
09/07 15:46, 2F
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09/07 15:47, , 3F
有沒有先測檢體的RNA濃度?
09/07 15:47, 3F
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09/07 16:56, , 4F
因為第一次測RT的NC汙染 所以重轉重定量
09/07 16:56, 4F
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09/07 16:56, , 5F
有用nanodrop測RNA OD值
09/07 16:56, 5F
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09/07 16:57, , 6F
兩次結果不同 就一直被老闆問為什麼會不同 = =
09/07 16:57, 6F
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09/07 16:57, , 7F
除了因為污染還有可能是什麼原因呢? 轉RT的效能也不同
09/07 16:57, 7F
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09/07 16:58, , 8F
??
09/07 16:58, 8F
推
09/08 10:53, , 9F
去看一下abi software裡Ct值的threshold line是否合理
09/08 10:53, 9F
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09/08 10:53, , 10F
有時step1+ 會沒設定好threshold要改成manual去調整
09/08 10:53, 10F
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09/08 10:54, , 11F
另外RT的牌子是? 可以試看看invitrogen和qiagen的 這兩組
09/08 10:54, 11F
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09/08 10:54, , 12F
我做出來同一組sample都穩定許多 有用過便宜牌子結果三重
09/08 10:54, 12F
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09/08 10:55, , 13F
覆Ct值也是差很多 兩個點可以去看看
09/08 10:55, 13F
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09/08 11:32, , 14F
感謝以上回答 會再去研究看看thx
09/08 11:32, 14F
推
09/09 01:09, , 15F
差...3~4個 Ct 我覺得蠻誇張的...雖然 RT 可能效能有差..
09/09 01:09, 15F
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09/10 00:24, , 16F
microRNA?
09/10 00:24, 16F
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