[求救] 細胞一直無法打散~

看板Biotech (生命科學)作者 (期待雨後的彩虹)時間14年前 (2011/09/11 13:50), 編輯推噓2(203)
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板上的專家你們好~ 我最近在養BHK cells發生一些問題,細胞解凍時我用了非常高的密度 (不怕你們笑,我解凍兩管1.5ml的細胞到一個25T, 補medium到5ml) 隔天換medium, 接著就開始routine的換medium與繼代~ 一開始應是trypsin的問題, trypsin處理,37度,15分鐘,有些細胞還牢牢的貼在plate上. 後來trypsin重配, 大概處理37度,5分鐘後, 細胞大部分都掉下來了, 但都是一片一片的, 我發現細胞一直打不散,不論是先小體積去打,混和後再繼續打, 還是增加打細胞次數, 還是無法打散這些細胞~ 這導致細胞數量不均勻,我後續要做BHK細胞的生長曲線也是困難重重~ 我本想trypsin處理再久一點, 但不知會不會對細胞造成傷害? 可否請版上專家給我一些建議? 謝謝你們~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.40.14.20

09/11 15:10, , 1F
trypsin濃度? 有無加EDTA??
09/11 15:10, 1F

09/11 21:13, , 2F
trypsin是0.25%, 我有加EDTA~
09/11 21:13, 2F

09/12 21:43, , 3F
我是用 trypsin-EDTA 0.5% 37度 5min
09/12 21:43, 3F

09/12 21:47, , 4F
謝謝提供~
09/12 21:47, 4F

09/16 12:16, , 5F
可以試試用巴斯德管打幾次後再加medium中和trypsin
09/16 12:16, 5F
文章代碼(AID): #1ER4meio (Biotech)
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