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[求救] MDCK 培養

看板Biotech (生命科學)作者 (NEil)時間14年前 (2011/09/28 02:50), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
留言10則, 3人參與, 最新討論串1/1
想請問，各位有養 MDCK 經驗的朋友 如果要把長滿的細胞「全部」收起來數 trypsin的量，和反應時間(加medium recover之前) 大概怎麼估 我們之前實驗室 routine 在做 75T 是加 4mL 讓它反應 30mins，後加 6mL medium 之後數 (很抱歉 trypsin 濃度我我沒有很確定) 當然我們的定不是標準做法。 現在因為實驗需要，要在 25T 和 6 well plate 中養MDCK並計數 請問這樣 trypsin 和反應時間要怎麼修正最好 謝謝！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.211.12
推
09/28 18:59, , 1F
我只有切過10 cm的，不知道能否幫上你的忙
09/28 18:59, 1F
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09/28 19:00, , 2F
如果是10 cm以1:2分盤隔天會滿的比例，我trypsin下2ml
09/28 19:00, 2F
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09/28 19:01, , 3F
10min左右就能全切下來，保險一點大約15min
09/28 19:01, 3F
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09/28 19:02, , 4F
1:4後天滿的比例，切的時間延長到15，20min會全切下來
09/28 19:02, 4F
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09/28 19:02, , 5F
1:6則要30min，通常無法完全切下來...
09/28 19:02, 5F
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09/28 19:05, , 6F
TE濃度是10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在10ml 1X PBS中
09/28 19:05, 6F
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09/28 19:07, , 7F
計數一樣是取6ml打勻後，取10ul和mem,trypon blue做稀釋
09/28 19:07, 7F
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09/28 19:08, , 8F
我通常是做四到八倍稀釋，沒有做過（全部計數）
09/28 19:08, 8F
推
01/10 01:32, , 9F
10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在9ml 1X PBS中 15min
01/10 01:32, 9F
推
02/06 23:49, , 10F
請問一下RNA Later如何使用於肝組織?使用效果如何?
02/06 23:49, 10F
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