[求救] EMSA的cross-linked問題
最近用Thermo的kit在做EMSA
但是做了四次有三次壓片完全沒東西!!!(我DNA放非常濃 所以成功那一次非常亮!)
所以我懷疑是transfer之後的過程有問題!
我run gel是用 TB buffer 先pre-run 220V 40mA (兩片,TB buffer必須要220V才能到40mA)
1hr , 再220V 20mA 2hr
之後transfer到PALL的Nylon membrane (positive charge) with 0.5 X TBE 100V 380mA
(兩片) transfer後等了大概五到十分鐘才拿起來用機器crosslink 3min
(我所用的PALL membrane上面寫說可以不用crosslink....)
之後完全照manual....
實在不清楚 到底是哪裡出問題 怎麼會membrane壓片壓超超超久都還是沒東西....
請問有哪位先進也有這問題的嗎? 最後是怎麼解決的呢? 謝謝
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