[方法] 關於用lentivirus感染primary neuron
大家 不好意思
我想請教各為一個關於lentivirus感染neuron的問題
我用lentivirus去感染neuron效率一直都不好
我的作法是收10盤10公分dish的293FT的上清液(共200 ml)
過.45 filter之後超高速離心純化病毒以200 ul的PBS+1% BSA回溶
這時病毒濃度極高，光5 ul就可以讓一盤10cm的SH-SY5Y全部表現GFP (效率應該有9成)
但這時我將這病毒濃縮液加100到一個6公分 dish的neuron(貼盤後3天的神經細胞)
表現GFP的neuron約1成不到....(對不起 我沒測titer XD)
astrocyte占全部細胞其實不多(約5%以下)，
但不知為何 感染成功的幾乎都是astrocyte.........= =
我有去問有達到號稱有95%感染效率的實驗室
他說他的作法是收10盤細胞的上清液(200ml)濃縮後全部加到12well的""一個well""
這樣可以有90%以上的效率
我聽了差點昏倒，養那麼多293T、離心濃縮如此的耗時
卻只能感染一個12well的"一個well"???????????!!!!
不曉得大家是否能給我一些建議
還是adenovirus會比較好?
謝謝
謝謝你!!!
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◆ From: 140.116.253.121
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