[求救] 真菌transform的方法
看板Biotech (生命科學)作者peggie0903 (dwz.tw/57pn)時間14年前 (2012/02/21 12:41)推噓1(1推 0噓 4→)留言5則, 2人參與討論串1/2 (看更多)
大家好 我最近在做Aspergillus的transformation
大致上是將孢子隔夜培養後
再用vino taste酵素處理兩小時 去除細胞壁 得到protoplast
之後再用1.2M sucrose為底 上層放培養液去離心
理論上protoplast應該會出現在培養液跟蔗糖的介面
但是我就是無法看到那明顯的分層.......
已經困擾很久了 拿不到protoplast的話就無法進行transform
可不可以請有經驗的版友 提供我真菌transform的方法？
或是提供一些意見
感謝大家了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.72.196
推
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我好像有點理解錯誤
以下是我follow的PAPER
We normally do this by layering the protoplasting mixture gently onto
a sterile 1.2 M sucrose cushion in a sterile, capped centrifuge tube (Sarstedt, cat. no. 62.547.004) and centrifuging at 1,800g
for 10 min at 4 °C in a swinging bucket rotor.
蔗糖應該只是在下面 不需要梯度的樣子
※ 編輯: peggie0903 來自: 210.59.89.52 (02/21 18:20)
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