Re: [求救] 請問如何避免蛋白質沈澱？

看板Biotech (生命科學)作者bluep (玫瑰的名字)時間14年前 (2012/02/24 18:18)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《lyu0001 (echoli)》之銘言： : 最近在純化his-tag蛋白質，將含有500 NaCl及20mM PBS的蛋白質溶液保存在-20度， : 隔天發現有很多白色沈澱，有上網找過液態氮急速冷凍法，或是加入glycerol（不喜歡） : ，請問大家都如何保存蛋白質？這真是大哉問啊! 我的老闆也常問我為什麼蛋白質又沈澱? 我都畢恭畢敬地說: "影響的因子有很多, 例如...., 所以我會再試試看條件!!" (其實心裡的OS是:XD誰知道哪個條件會沈澱啊?你也不知道怎樣好啊!!) 但至少有一句不是廢話, 就是"試了就知道" 通常我會先試buffer種類(PBS, Tris, HEPEs) 然後試鹽類濃度(100mM~500mM NaCl, 100mM為梯度) pH也應該試(這因子其實最重要) -------------------------------------------- (以下懶人作法, 最好不要學) 但是因為很懶惰同一種buffer配很多pH和鹽類濃度所以我都是在兩管蛋白中分別往上滴鹼和往下滴酸, 或者往上加鹽類濃度(5M NaCl往eppendrof裡滴定) 看何時會變澄清. -------------------------------------------- 如果濃度不需要太高就不要濃縮太濃如果4度C很穩定也可以不用冷凍如果要冷凍液態氮和-80度C會比-20度C好如果要測activity assay或者解結構, 我也不喜歡加glycerol 如果有好方法歡迎提出來討論如果有一種公式可以看序列就知道何種buffer條件適合就太好了!! Oh Yeah!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.55.233