[求救] DCFDA染劑測細胞ROS 但control組卻有螢光
小的是使用貼附型HSC-3細胞進行實驗
由於聽說medium及trypsin會影響測出來的螢光表現
所以有幾個步驟是特別去除medium跟trypsin的動作
我的實驗步驟如下:
1. 細胞總共分為四組: 不染染劑, negative control, positive control, 藥物組
2. 藥物組已事先加藥處理24小時, 而positive control則是使用550uM的H2O2處理一個
小時(in medium)
3. 將四組的medium吸除 加入20uM的DCFH-DA染劑 in 含5% FBS的PBS (不染染劑組不加
DCFH-DA) 37度C 30mins
4. 吸掉含染劑之5% FBS PBS 使用PBS wash
5. trypsin打下細胞 加入含0.2% FBS PBS的離心管中
6. 離心完後去上液 回溶 1ml PBS 上機 (流式細胞儀)
不過上機後的Data 將完全不染的組別螢光調至約10^0處時 發現光上negative control
螢光強度就爆衝到約10^3 而之後上positive control, 加藥組 螢光強度也與negative
control幾乎相同
請問發生這種問題是因為染劑問題嗎? 還是因為我的實驗中有哪個步驟出現錯誤呢?
因為negative control就有這麼強的螢光表現實在不太尋常...
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