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Re: [求救] 細菌生長曲線測定

看板Biotech (生命科學)作者 (我真的宅爆了XD)時間13年前 (2012/10/25 15:47), 編輯推噓3(3推 0噓 39→)
留言42則, 6人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
不好意思 我想承接這篇文章請教大家一個相關的問題 我也是要表現protein 用BL21(DE3)這隻菌 因為實驗在兩個地方做 所以測菌量的方法有點不同 我想要把兩邊的系統統一起來 但卻得到奇怪的結果 >"< 1. 在台大 --> 用分光光度計 前一天先挑一顆single colony到LB中 37度 180rpm overnight 隔天早上 取50uL加到5mL LB中 37度繼續搖約1.3hr 此時用分光光度計測 600nm O.D.為0.382 (來有另一值為0.191A --> A上應該有個小圈圈) 同一菌液sample 馬上on ice 移至中研院 (車程約1hr) 2. 在中研院 --> 用Nanodrop 1000 台大帶來的菌液馬上測 (使用cell culture mode) 600nm Abs. 0.028 Cursor Pos. 280nm Abs. 0.179 因此想請問各位大大 兩邊側起來的讀值 該怎麼整合會比較好?? 我知道菌在冰上仍會長 所以不可能得到完全相同的讀值 (畢竟機器間也有bias) 我只求我在兩邊做的實驗不要差異太大 謝謝大家! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.57.12 ※ 編輯: dhaphy 來自: 140.109.57.12 (10/25 15:49)
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10/25 17:10, , 1F
在中研院養.....
10/25 17:10, 1F
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10/25 17:46, , 2F
請問樓上的大大的意思是??? 我有點catch不到問題點 @@
10/25 17:46, 2F
推
10/25 20:24, , 3F
菌液請搖勻 再取樣, 不然, 誤差很大.
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10/25 22:09, , 4F
樓上a大您好 我有搖勻 :) 也pipetting了好一陣子後馬上取!
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10/25 22:10, , 5F
那 如果我改個方式問... 若是實驗protocol要求OD達0.4以後
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10/25 22:11, , 6F
就可以開始IPTG induction 那 用nanodrop測的哪個值就是
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10/25 22:11, , 7F
protocol中要求的"0.4"呢? 謝謝大家!!!
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10/25 22:51, , 8F
真好奇中研院哪一台nanodrop可以讓你放菌不怕污染？
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10/25 22:52, , 9F
建議你還是在中研院找一台分光光度計,一般的OD測量是以1cm
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ㄜ.........所以會汙染啊 @@ 那我明天乖乖去消毒 OMG
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謝謝樓上b大 因為我翻了nanodrop手冊說可以測cell culture
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石英管穿透之後的透(吸)光值做為代表,所以隨著距離變長變短
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10/25 22:54, , 13F
OD值就會變化,但一般來說nanodrop是經過校正才能測260/280
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10/25 22:55, , 14F
又上網查了 有人用nanodrop測菌液吸光值 就以為可以這樣~昏
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10/25 22:56, , 15F
的吸光OD,但是測菌液並不是測吸光,而是測濁度,因此所以nano
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10/25 22:57, , 16F
內建的的校正公式無法把OD600反應在一般分光光度計的數值
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謝謝b大的指導以及提醒 我要開始懺悔了 >"<
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10/25 22:58, , 18F
就像ELISA reader可以測OD600,但數值也不會跟一般的範圍
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10/25 23:00, , 19F
我不建議自做不同機器的數值轉換,因為你不熟原廠的數值校正
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不好意思 想不要臉的再請教 該怎麼清理測過菌液的nano較好?
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有必要請廠商來清理嗎? 還是可以自己做一些清潔(罪惡感 @@)
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10/25 23:45, , 22F
我的意思是 何不在中研院transfer後培養至需要的OD值
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為何要分兩地奔波
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回應樓上s大 因為這學期小的剛好必須回台大rotation 但有時
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又要趕回中研院開會或是做實驗 為了搶時間 想要把在台大學
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的實驗 有時可以利用在中研院的空檔 一起做...好像太貪心:(
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10/26 00:19, , 27F
說真的 如果可以在一邊做就好 我也很想 TUT(其實是貪心 哀)
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而且你這樣攜帶也不保險 今天是帶BL21實驗室菌株 還好
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10/26 00:37, , 29F
哪天實驗材料換成具傳染性的菌株 會有觸法疑慮
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10/26 00:39, , 30F
而且你這樣趕著做 中間操作變因徒增 如果不具再現性
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10/26 00:39, , 31F
真的只是給自己找麻煩而已
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10/26 01:41, , 32F
謝謝s大建議 我會審視一下自己實驗的規劃的~ 感謝喔!
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推
10/26 01:49, , 33F
http://ppt.cc/L-_c 26網頁 菌量看 細菌濁度標準管最準-_-
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10/26 02:42, , 34F
謝謝j大喔 :) 感謝以上的大家 給了我很多很棒的指導 感恩!!
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推
10/26 12:38, , 35F
中研院很多所得nanodrop都有規定只能測DNA/RNA
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因為怕測別的沒清乾淨會影響讀值
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之前有人拿來測蛋白質結果後來測DNA時
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誤差就變大了（剛好有兩台）因為蛋白質比較不
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易清理乾淨，後來還請廠商來清=_=
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10/27 14:38, , 40F
昨天已與廠商聯絡 的確如樓上n大所說 蛋白較難清理 容易殘
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留 菌液的部分廠商建議ddH2O 5uL清洗數次且時間長些即可
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10/27 14:41, , 42F
並且昨日清潔完畢再測核酸 正常!... 謝謝各位大大給的建議!
10/27 14:41, 42F
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