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[求救] E.coli electroporation

看板Biotech (生命科學)作者 (阿冠)時間13年前 (2013/01/31 04:49), 編輯推噓0(0推 0噓 16→)
留言16則, 4人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請問各位 electroporation如何避免電爆呢? 最近每電必爆 前陣子成功率還蠻高的，快氣死人了 實驗的條件為1900 V 約40 ul competent cell 加10 ul ligated plasmid 外觀看起來沒有氣泡，水滴也有擦乾 plasmid量太多會有影響嗎? 或是plasmid體積太大影響電阻? cuvette也有放冰上預冷 但預冷是要把整根金屬部分都埋進去呢? 或是大概菌液會接觸到的部分就足夠? 還有其他可能失敗的原因嗎? 實在是電到很挫折啊... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.99.150
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01/31 05:32, , 1F
另外請教，爆過的cuvette還可以reuse嗎??
01/31 05:32, 1F
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01/31 08:34, , 2F
之前做是整個金屬部分都放下去預冷
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01/31 08:34, , 3F
是否有其他的cuvette可以試試看!?
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01/31 11:59, , 4F
cuvette要用超音波洗過，DNA太濃 鹽濃度過高必爆
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01/31 15:03, , 5F
好像是喔，同一個vector作self-ligation，不加insert
01/31 15:03, 5F
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01/31 15:05, , 6F
改補ddH20，濃度約減半，就成功了(雖然還是失敗一次)
01/31 15:05, 6F
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01/31 16:12, , 7F
測了260/230=1.5，請問這sample鹽濃度是可接受的嗎?
01/31 16:12, 7F
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02/02 19:09, , 8F
爆過還是可以再用 我以前都用到外表龜裂 或是只加水也會爆時
02/02 19:09, 8F
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02/02 19:11, , 9F
才會丟掉 另外你ligation product加越多 整體鹽濃度越高
02/02 19:11, 9F
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02/02 19:11, , 10F
就越容易爆管 如果ligation有成功 其實你加2-3 ul就可以了
02/02 19:11, 10F
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02/02 19:15, , 11F
但你ligation的條件我不知道 所以你得自己抓適合的體積
02/02 19:15, 11F
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02/02 19:15, , 12F
加到10 ul實在太多就是...
02/02 19:15, 12F
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02/03 05:23, , 13F
感謝大家的回答喔，不過還有一點不太明白，DNA太濃為
02/03 05:23, 13F
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02/03 05:26, , 14F
何也會造成arcing呢? 因為DNA帶負電嗎?
02/03 05:26, 14F
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02/03 10:49, , 15F
我不清楚DNA的帶電是否會影響 但當你把DNA濃度放大時
02/03 10:49, 15F
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02/03 10:51, , 16F
溶液中) 畢竟純化的DNA溶液中不會只有"DNA"
02/03 10:51, 16F
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