[求救] glycerol stock 若是被雜菌污染

看板Biotech (生命科學)作者 (allthebest)時間12年前 (2013/05/04 23:46), 編輯推噓3(3020)
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事由:plasmid transfection細胞後一直污染 做法:stock 種midi 然後抽plasmid plasmid+jetpei+transfers buffer 做transfection(24hr觀察就有長菌了) 已重抽兩遍....做transform都有污染... 已做的truble shooting: 1.2.3.buffer,plasmid,jetpei only 4.plasmid+buffer+jetpei 結果1,2,3乾淨4又長菌了(我要崩潰了)到底為什麼啦?(爆氣 尤其是我一次抽很多不同midi 只有這一隻plasmid怪怪的 總之我決定重新transform 不過先假設是我眼殘(沒在plasmid only看到有菌)真的是plasmid有污染好了 我很好奇如果在stock有雜菌在抽完plasmid後也會有菌菌污染嗎?(我很確定elution buffer是乾淨的)但就算stock有雜菌我最後不是也只會得到雜菌的plasmid嗎??? -- posted from android bbs reader on my ZTE T3 https://market.android.com/details?id=com.bbs.reader -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 101.9.217.244

05/05 01:04, , 1F
你有試過把plasmid在hood中做酒精沉澱重新回溶嗎?
05/05 01:04, 1F

05/05 01:50, , 2F
沒有耶 不過我用的midi prep kit的wash buffer倒是有
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05/05 01:52, , 3F
所以x大的意思是 抽完並elute出來的plasmid要再做一次
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05/05 13:26, , 4F
如果你已經抽出plasmid,卻懷疑他可能有汙染,可以再做
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05/05 13:27, , 5F
一次酒精沉澱把汙染物去掉。
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05/05 13:28, , 6F
基本上凍菌就算有汙染,也只會讓你種LB時就長雜菌或發霉
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05/05 13:29, , 7F
,或是抽出莫名其妙的plasmid,不會把汙染物帶到elute中
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,因為抽plasmid的buffer 2 基本上會殺光細菌黴菌。
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05/05 13:30, , 9F
你有試過排除其他可能汙染源嗎?例如把medium拿去incub-
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05/05 13:30, , 10F
ator 放個1、2天?
05/05 13:30, 10F

05/05 20:54, , 11F
同意樓上~不然每次transfection都會有E.coli汙染(也是菌啊)
05/05 20:54, 11F

05/05 20:56, , 12F
測: plasmid only, jetPEI only, serum free medium only
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05/05 20:56, , 13F
serum free medium是transfection時使用的那個
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05/05 21:00, , 14F
orz 有點搞錯 jetPEI是用NaCl, 不是用medium 就測NaCl看看
05/05 21:00, 14F

05/05 21:03, , 15F
然後可以測久一點 有時因時間太短不明顯所以會誤判沒汙染
05/05 21:03, 15F

05/05 22:22, , 16F
buffer2含SDS不就破菌了嗎?stock有污染也不會到plasmid
05/05 22:22, 16F

05/06 14:53, , 17F
我也知道問題有點蠢 因為發文後半段也有寫頂多只抽出
05/06 14:53, 17F

05/06 14:54, , 18F
雜菌的plasmid
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05/06 14:55, , 19F
我也有空培 back only,plasmid only
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05/06 14:55, , 20F
雜菌的plasmid是三小?
05/06 14:55, 20F

05/06 14:55, , 21F
nacl only (打錯
05/06 14:55, 21F

05/06 14:57, , 22F
請連著看 ="=
05/06 14:57, 22F

05/10 16:13, , 23F
怕抽到雜菌的拿去enzyme digestion跑膠看看阿
05/10 16:13, 23F
文章代碼(AID): #1HXIrXpC (Biotech)
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