[討論] 關於實驗設計的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (ilovesuju)時間12年前 (2013/06/09 04:39), 編輯推噓3(3016)
留言19則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
我的實驗假設是A protein會增加N protein的表現量(或穩定度 或活性 尚未知) 我的老闆認為,同時co-transfect 表現A和N protein的plasmids到細胞內時, 應該要看到N protein上升。 但我不這麼認為,因為這樣變因就很複雜了。 不管是transfection efficiency的差異, 或是promoter之間的競爭(因為兩個plasmid皆由CMV調控), 但我老闆似乎不接受我的看法, 各位版友們有沒有更詳細的解釋或是觀點可以跟我討論呢? 謝謝各位! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 95.117.109.93

06/09 05:33, , 1F
如果老闆堅持要做co-transfect的話 我會做 1. N only
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06/09 05:35, , 2F
2. functional truncated A + N and 3. full length A + N
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06/09 05:35, , 3F
然後比較N的表現量
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06/09 05:47, , 4F
推樓上,不過"老闆是對的",怎樣的對自行推敲
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06/09 05:51, , 5F
只要送A進去之後用WB看N的變化就知道結果了,co-trans太厚工
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06/09 05:55, , 6F
畢竟任何的事前觀點都無法精準預測A與N的唯一情況,但是A與N
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在co-transfect各種現象也能找到對應的解釋來套用實驗結果
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06/09 06:08, , 8F
我最近的A,N符合你的實驗假設,不過當co-tr A,A+N,N,以適當
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06/09 06:09, , 9F
vector調整transfactant後,的確看到A存在些微增加N表現,但
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06/09 06:13, , 10F
A卻比單獨A來得少,矛盾的是我卻不能就此認定N會抑制A,如此
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06/09 18:37, , 11F
簡單一點 就是看mRNA的表現量啦
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06/09 18:38, , 12F
而且在你的假設中 是透過後轉譯修飾還是轉錄調控?
06/09 18:38, 12F

06/09 18:38, , 13F
不過我想會牽扯到表現 應該是後轉譯修飾了啦XDD
06/09 18:38, 13F

06/09 18:39, , 14F
轉錄調控做reporter assay就OK了
06/09 18:39, 14F

06/10 16:39, , 15F
qPCR mRNA若有增加 探討promoter活性 or mRMA stability
06/10 16:39, 15F

06/10 16:42, , 16F
qPCR沒有增加 表示蛋白質的 穩定度or轉譯or降解 改變
06/10 16:42, 16F

06/10 16:45, , 17F
BOSS會這樣想 大概proteinA 不是transcription factor
06/10 16:45, 17F

06/10 16:49, , 18F
猜proteinA修飾N使其穩定 or proteinA抑制 降解機製
06/10 16:49, 18F

06/11 05:54, , 19F
哈哈, j大和c大好像偵探啊!都猜對了!
06/11 05:54, 19F
文章代碼(AID): #1HivPhoB (Biotech)
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