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Re: [求救] 關於細菌蛋白表現

看板Biotech (生命科學)作者 (zerofield)時間12年前 (2013/06/30 21:46), 編輯推噓5(5推 0噓 15→)
留言20則, 6人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
: : -- : ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) : ◆ From: 114.38.50.52 : 推 licat:XL1-blue(DE3)也是pET系統常用的host strain之一 06/28 09:35 : → licat:pET系統主要是跟T7 promoter以及DE3有關 建議細讀一下手冊 06/28 09:38 : → KittyGod:XL1-blue非常少看到有人拿它來表現蛋白質耶 06/29 10:00 : → KittyGod:pET system應該是利用T7 promoter搭配T7 polymerase的菌 06/29 10:01 : → KittyGod:XL1-blue好像沒看到有表現T7 polymerase的基因耶 要詳查 06/29 10:02 : → KittyGod:要不要跟老師說一下啊 06/29 10:02 : → KittyGod:我看到的XL1只有拿來保存植體用 06/29 10:03 : → KittyGod:BL21很容易買到 06/29 10:04 不好意思 我現在才想到要上來看... 兩位大大 我不知道要相信誰耶XD 不過學弟已經開始在作了... 我相信他老闆應該不是很懂 因為他老闆是聽來的.... 我們實驗室是不會拿XL-1來表現蛋白啦 但是我實在不確定 所以上來問問 話說我要相信誰XD -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.38.28.169
推
06/30 23:26, , 1F
Bl21&bl21star 很常用來表現蛋白，至少我待過的三個lab都是
06/30 23:26, 1F
推
06/30 23:28, , 2F
以此來表現，除非有特別的因素才會用rosetta或是其他的表現
06/30 23:28, 2F
→
06/30 23:29, , 3F
保存Plasmid主要是用dh5alpha,因為比較不會有mutation
06/30 23:29, 3F
→
07/01 10:45, , 4F
有用過dh5a 表現蛋白 還有出現其他顏色的菌落
07/01 10:45, 4F
推
07/01 12:25, , 5F
一般都用BL21 但有時候表現不出來也會嘗試XL1和DH5a之類的
07/01 12:25, 5F
→
07/01 15:32, , 6F
XL1-blue 跟 XL1-blue(DE3) 是不一樣的哩，pET質體是T7
07/01 15:32, 6F
→
07/01 15:33, , 7F
promoter 就只能放XL1-blue(DE3)才能表現，其實應該去查
07/01 15:33, 7F
→
07/01 15:33, , 8F
菌種原廠的說明書裡頭的基因型，看有沒有把rec之類的拿掉
07/01 15:33, 8F
→
07/01 16:40, , 9F
有XL1-blue(DE3)的相關資訊嗎? 我一直找不到 有BL21(DE3)
07/01 16:40, 9F
→
07/01 16:44, , 10F
還有一般的DH5a應該不能應用在pET system
07/01 16:44, 10F
推
07/01 19:31, , 11F
沒有DE3的話都不能用 有DE3的host則都有一試的價值
07/01 19:31, 11F
→
07/01 19:33, , 12F
因為有時理論是理論 哪個host適用你的蛋白質還真不試不知道
07/01 19:33, 12F
推
07/01 19:34, , 13F
實驗室常用的E. coli分為K12與B strain兩種
07/01 19:34, 13F
→
07/01 19:37, , 14F
BL21是屬於B strain, 常用於cloning的都屬於K12
07/01 19:37, 14F
→
07/01 19:38, , 15F
因此是可以用XL1-blue(DE3)試試看的 我自己有同時做過
07/01 19:38, 15F
→
07/01 19:39, , 16F
同一個pET表現質體 在這兩個host中 表現量有很大差異
07/01 19:39, 16F
→
07/01 20:40, , 17F
剛查了一下XL1-blue 是strategene的產品
07/01 20:40, 17F
→
07/01 22:34, , 19F
這個stratagen的XL1-blue也是沒寫他有T7 polymerase
07/01 22:34, 19F
→
07/01 22:38, , 20F
哈哈 我一直查不到市售的XL1-blue(DE3) 所以好奇
07/01 22:38, 20F
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