Re: [求救] inclusion body回融不出我的目標蛋白
各位...謝謝你們
我後來改成induction 25度 iptg 2000x
用6m guanidium hydroxychloride binding buffer 有溶出目標蛋白
但是無法和his column 結合
※ 引述《coco85101 (我不是李紋)》之銘言：
: 各位好
: 我已經卡在蛋白純化很久了
: 希望大家可以救救我
: 我目前利用pET29-target protein(有His) transform到E.coli BL21(DE3)去進行表現
: IPTG induction 4hrs後
: 開始以 1X Binding buffer 回融菌 破菌 (sonicator 0.8/0.8 Amp37% 1hr)
: *500mM NaCl , 20mM sodium phosphate
: 破菌後離心 分為soluble form 和 inclusion body
: inclusion body再以 1X 6M urea binding buffer回融O/N
: *500mM NaCl , 20mM sodium phosphate , 6M urea
: 隔天離心後
: 發現我的目標蛋白沒辦法回融在含6M urea的binding buffer內
: 學長姐以前也從來沒遇過這種問題
: 我的目標蛋白不是膜上的蛋白,沒有signal peptide , 有兩個ZinC finger
: 也確定過已經大量表現了
: 且破菌時間蠻長的，應該菌都打破了阿
: 請各位救救我啊....
: 謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 116.59.89.91
→
08/11 21:23, , 1F
08/11 21:23, 1F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
195
461