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[求救] 養菌用的agar

看板Biotech (生命科學)作者 (重新尋找)時間12年前 (2013/09/24 18:19), 編輯推噓6(6推 0噓 25→)
留言31則, 10人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
最近實驗室陷入一種很詭異的狀況.... 我們家舊的做盤用的LB agar(廠商混好的那種)用完之後，就回歸分開配的。 配方如下： Tryptone 3g NaCl 3g Yeast extract 1.5g agar 3g 水補到 300ml 本來我們做一瓶agar是到400ml 但不知道那台滅菌釜是又發生什麼事情，拿400ml去滅 (瓶子是500ml血清瓶)滅出來會只剩350ml....為了怕體積減少影響濃度所以減到300ml。 這樣滅完之後體積不會減少，但怪事又發生，變成LB agar濁濁的好像根本沒融化，搖一 搖還可以看到有細粉狀漂浮物，就算拿去微波爐也無法消除。 第一次是用GeneMark家的agar，那時候我就發現GM的agar比我們之前用的還要白一點。後 來退貨換成承洺的agar，結果還是一樣。 有懷疑過是不是滅菌釜又掛點所以拿去隔壁系的滅菌釜滅，結果依然一樣。 有試過先煮滾再滅結果還是無法使之均質透明。 然後這樣做出來的盤，就算在hood裡靜置兩天還是會大出水，接著就長超臭的雜菌。 那個大出水真得很誇張，我本來以為晾了兩天還怕會乾掉，沒想到卻是大出水....完全無 法理解那麼多的水是從哪來的?!那個目測至少有50ml吧!!!乍看之下真得很像被人家倒水 進裝盤的袋子。之前看到的還是透明的水，勉強解釋成水蒸氣吧... 今天看到的卻是LB顏色的水!!可是盤子裡還是有agat..... 就算想惡作劇也不會浪費到拿LB來灌吧......... 發生這些狀況的盤，做完都不超過一個月。 LB的配方跟上面附的一樣只是沒有agar，但LB就非常正常，透明乾淨無雜質。 實驗室從來沒遇過這種狀況，學長們也束手無策，只好上來請教版眾了Q Q這狀況到底怎 麼發生?又該如何解決? 雖然有說服老師下次買廠商混好的LB agar，但眼前這罐總得用完吧... (雖然我真的不想用，囧) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.196
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09/24 19:16, , 1F
LB一罐沒多少錢啦,浪費的petri dish都不只
09/24 19:16, 1F
推
09/24 19:36, , 2F
你們有試過在hood倒plate嗎？會不會是你們環境問題?
09/24 19:36, 2F
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09/24 19:37, , 3F
因為LB沒長菌，所以應該是在倒plate的過程污染了，我猜
09/24 19:37, 3F
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09/24 19:46, , 4F
我們一直是在hood倒盤的~
09/24 19:46, 4F
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09/24 19:56, , 5F
一般的agar plate大概是1.5%,你們以前400變350ml至少濃度會
09/24 19:56, 5F
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09/24 19:57, , 6F
增加,現在300ml體積不變的話,agar濃度只有1%....
09/24 19:57, 6F
推
09/24 20:31, , 7F
1.5% +1，另外自配的話有調pH值嘛？
09/24 20:31, 7F
推
09/24 20:40, , 8F
另貴實驗室autoclave壓力有到20psi嘛？液體會滾有點怪
09/24 20:40, 8F
推
09/24 23:02, , 9F
PH值吧 會影響到凝固和菌的生長
09/24 23:02, 9F
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09/25 09:46, , 10F
直接試試看只有Agar看看會不會凝?
09/25 09:46, 10F
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09/25 10:27, , 11F
因為一開始用1.5%粉末混濁狀況會更嚴重 加上版上有查到
09/25 10:27, 11F
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09/25 10:27, , 12F
1%才改的 以前也是用1.5%+1
09/25 10:27, 12F
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09/25 10:27, , 13F
其實自配之前也用過也沒問題 是換了agar之後開始的
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09/25 10:28, , 14F
詭異的點在於連換兩家都一樣...
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09/25 10:28, , 15F
直接拿去煮ok 可是不知道為啥搭了LB就不行 這兩個分開
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09/25 10:28, , 16F
都很好Orz
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09/25 10:29, , 17F
我們之前一樣的配方做法都ok 是換了GM的agar開始變這樣
09/25 10:29, 17F
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09/25 10:30, , 18F
壓力沒問題 因為拿去隔壁系的也是一樣狀況...
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09/25 10:31, , 19F
調pH值唷..以前沒這樣做過._.可以講解一下嘛XD
09/25 10:31, 19F
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09/25 10:44, , 20F
pH要7-7.4，因為LB裡面沒有buffer，所以pH變動會很劇烈
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09/25 10:45, , 21F
如果不進autoclave，一般建議是heat plate for an hour
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09/25 10:46, , 22F
試試先把LB溶好均勻清澈後，再加agar去滅。
09/25 10:46, 22F
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09/25 11:40, , 23F
我有試過加熱板先煮 不過大概只有30min滾了我就拿去滅
09/25 11:40, 23F
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09/25 11:40, , 24F
了 先溶LB再加agar我會試試看!
09/25 11:40, 24F
推
09/25 12:51, , 25F
400ml滅完會剩350ml,應該是Agar品質差~會突沸而噴出
09/25 12:51, 25F
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09/25 12:52, , 26F
既然LB broth沒問題,那問題就出在Agar上~用Agar alone試
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09/25 12:52, , 27F
看光Agar溶於水微波加熱~是否可全溶,又是否會突沸
09/25 12:52, 27F
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09/25 13:06, , 28F
喔忘記說 實驗室有人直接拿agar加水去煮是會溶的 不過
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09/25 13:07, , 29F
那時候我人不在現場就是了..
09/25 13:07, 29F
推
09/27 23:22, , 30F
我們實驗室都是用粉+水 沒溶就去滅 也沒調pH
09/27 23:22, 30F
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09/27 23:23, , 31F
都沒甚麼問題 滅完會有一點濁 搖一搖就好了
09/27 23:23, 31F
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[求救] 養菌用的agar
yawai
14年前, 09/01
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