Re: {求救}小鼠組織石蠟切片IHC
※ 引述《chaichi (chaichi)》之銘言：
: 我是在做小鼠眼睛的石蠟切片染色,用IHC來染色,使用ABC法,
: 用脫蠟.vector的ABC之後再用DAB呈色再用hemoxylin染核,但是我染了很多次都沒染出訊號
: control(沒加一抗)和有加抗體的有顏色深淺差異
: 但從有加抗體那片我無法判斷出哪裡是有訊號的
: 一片咖啡色,沒有一點一點的深咖啡色訊號
: 我在做DAB呈色時,有在顯微鏡下觀察,且成色時間不長,所以應該不會背景太深
: 而我染的組織前面的學長有做過同樣天數眼睛的IHC有染出訊號過
: 可以確定此組織可以染出訊號
: 我想問這樣我該怎麼辦才能染出訊號?
: 還有我想問取下組織後泡福瑪鈴的時間長短會有影響嗎?
: 因為一直做不出來 實在好困擾
: 希望有人可以告訴我 謝謝
以前也做小鼠眼球染色(螢光和DAB呈色)
我覺得臘切眼球比較容易遇到的問題是 切片常常破片(lens的原因)
但你好像沒這方面問題
但是有幾個問題
1.你要看到位置是眼球哪個位置?角膜?視網膜?還是..?
2.你染的是什麼蛋白?正常表現狀況?表現位置?
3.脫臘的過程也會影響你的呈色?有antigen retrieval嗎?是用什麼方式?
你只用了兩個字帶過。(常常染不上去、背景值高可以改善這步驟)
4.抗體稀釋比例也會影響背景值，也沒有提供相關資訊
5.你用什麼固定?福馬林是formaldehyde 還是 paraformaldehyde?
很努力看才看懂你文章 =_=
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