Re: [求救] 掃描式電子顯微鏡量測細胞之固定動作

看板Biotech (生命科學)作者AllisonSM (AllisonSM)時間12年前 (2014/01/03 13:18)推噓0(0推 0噓 0→)

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請問用4%PFA和5%GTA固定細胞分別需要多少時間? 我查到的文獻是用2.5%的glutaraldehyde後用4% OsO2 還要再用tannic acid處裡可以麻煩做過的高人提供完整的固定過程嗎????? Please~~~~~~~~~ 感謝!!!!! ※ 引述《pooldodo (破渡渡)》之銘言： : ※ 引述《qkla (努力阿)》之銘言： : : 我想請問高手,因為sem我沒做過也沒看過 : : 但學長是使用甲醛來固定高分子薄膜上面的細胞 : : 分別40%,50%....這樣固定 : : 所謂固定是怎樣呢,是將薄膜浸入甲醛一段時間這樣就可以了嗎 : : ,還有固定完了的臨界乾燥手續,有強者可以說明看看嗎 ? : : 感謝大家 : 我不是高手，不過可以給你一點建議 : 一般固定是為了防止細胞在接下來的處理步驟過程中變形 : 所以我們會使用 paraformaldehyde 以及 glutaldehyde 做固定（可能拼錯） : 甚至再使用 osmium 固定，防止細胞在脫水的時候變形 : 這邊濃度跟固定時間都依照樣品的不同而不同 : 我想你可以參考實驗室學長使用的濃度 : 但 formaldehyde 絕對不可能是 40 or 50%...... : 我想你這裡所謂的 40%, 50%... : 指的應該是接下來脫水的步驟 : 因為樣品在上 CPD 前必須經過 ethanol or acetone 的脫水 : 這個時候我們會使用連續不同濃度的 ethanol or acetone 來脫水 : 因為你的 sample 是固定在特殊的薄膜上 : 我不知道你的問題在哪裡，也不知道你是固定在什麼樣的材料上 : 如果你還需要什麼樣的建議或幫忙 : 也許你可以把問題描述的更詳細一些 : 這樣我們也比較好之道你需要的是什麼樣的東西~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.10