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[求救] LNCap一pass就死一半

看板Biotech (生命科學)作者時間11年前 (2014/03/03 14:26), 編輯推噓2(2推 0噓 7→)
留言9則, 1人參與, 最新討論串1/1
小弟最近開始接觸LNCap這個細胞株(購自食品所) 上網爬文又自己養了一陣子覺得還真的不好養@@ 買來剛解完貼得超漂亮,但pass細胞後就長不好了 我已經知道這個細胞株容易飄,但不曉得為什麼每次pass細胞就死了3~4成 在顯微鏡底下觀察到許多疑似死細胞的黑色無光線折射殘骸 (也亮亮一坨坨飄在medium,但有人說是活細胞!?) 我試過以versene和trypsin處理細胞,結果都差不多 Medium配方(參考食品所):Sigma RPMI-1640 (Product No. R6504)(已含2mM L-glutamine), NaHCO3 2g/L, HEPES 2.98g/L, D-Glucose 4.5g/L(有再外加補到final conc.), Sodium pyruvate 1mM, 10% FBs, 1% P/S抗生素 請問這樣的medium可以嗎? 把LNCap打下來可以pipetting嗎?力道又是如何呢? 感謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.48.9
推
03/03 15:16, , 1F
這個細胞真的比較容易飄起來, seeding後請讓它貼附生長
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03/03 15:17, , 2F
至少24小時之後再去做實驗會好一點, 貼附的話, Corning有
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出一款cellbind的dish, 用來養這類型的細胞, 還不錯用
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medium的話應該沒太大問題, 我也用一樣的配方 (其實配方
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ATCC或者食科所都差不多), 我的medium是用Gibco liquid的
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打下來的話, 我是用trypsin 3~5分鐘, 其實PBS沖也會下來
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沒碰過死的這麼慘的問題, 要不要check一下CO2培養箱的
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CO2濃度? 以前用過Thermo可以滅菌的培養箱, 曾經發現滅菌
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推
03/03 15:23, , 9F
後或者使用久了之後, CO2的濃度會跑掉, 以上為個人經驗.
03/03 15:23, 9F
感謝~ 我細胞pass完第二天才趕動它 細胞是用corning一般的dish(Standard Tissue Culture Treated) 請問coat poly lysine可以嗎? thx~ ※ 編輯: chenmick 來自: 203.64.48.9 (03/04 12:44)
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