[求救] G418 stable clone

看板Biotech (生命科學)作者 (tabo)時間11年前 (2014/03/14 19:49), 編輯推噓5(506)
留言11則, 7人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等)之分讓, 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作 簽署材料分讓協議(MTA),否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 目前實驗正在挑stable clone 藥篩是用G418 800microgram/microliter 可是細胞在第5天才開始死亡 死亡的很慢 而且細胞數很多 幾乎到第三層了 因為當初transfection 怕轉不進去 轉了兩次 細胞就變那麼多了QAQQQQQ 現在幾乎還是全滿的狀態 只是細胞有飄比較多起來 當初做藥量測試 細胞沒那麼多 現在細胞數增多 加上他死得那麼慢 細胞會不會產生對G418的抗藥性? 現在要篩1個禮拜 還可以增加G418的濃度嗎? 請高手大大們指點~ 目前卡卡中QAQQQ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.23.37.126

03/14 20:16, , 1F
你得把細胞弄下來分盤稀釋讓細胞慢慢分裂生長個幾個禮拜
03/14 20:16, 1F

03/14 20:18, , 2F
藥篩一個禮拜了 可以分盤嗎?
03/14 20:18, 2F

03/14 22:48, , 3F
一直subculture吧 等transient效果退了 真正integrate
03/14 22:48, 3F

03/14 22:49, , 4F
進到genome的極少部分細胞才會慢慢變多
03/14 22:49, 4F

03/14 23:16, , 5F
分盤稀釋倍數高一點,之後每兩到三天換medium讓細胞分裂生長
03/14 23:16, 5F

03/14 23:18, , 6F
有integrate進genome的細胞才能存活下來,細胞太滿根本無法
03/14 23:18, 6F

03/14 23:19, , 7F
生長,當然也不會被G418殺死阿~
03/14 23:19, 7F

03/15 05:30, , 8F
你用的濃度到底是多少阿? 800ug/ml?
03/15 05:30, 8F

03/16 09:52, , 9F
800ug/ul 有點驚人...
03/16 09:52, 9F

03/16 11:41, , 10F
造他細胞的死亡速度 應該是ug/ml 他應該打錯
03/16 11:41, 10F

05/23 11:43, , 11F
一點都不驚訝....我用25 mg/mL G418 竟然殺不死SW620 見鬼
05/23 11:43, 11F
文章代碼(AID): #1J8kp98M (Biotech)
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