[求救]蛋白質定量

看板Biotech (生命科學)作者 (大能)時間11年前 (2014/04/02 15:18), 編輯推噓4(4019)
留言23則, 5人參與, 最新討論串1/1
請問大家,我最近在跑WESTERN. 可是每次定量都不一致 使用BSA去求R平方,以及BIO-RAD-PROTEIN蛋白試劑 配成400ul 總total取100ul放到96-well上去測ELISA 蛋白sample則取2ul和試劑398去混勻 也是取100ul 定量出來後去跑western, 每次的control和DMSO的表現量都會比其他下藥的蛋白還要多 是使用coomassie blue去染色一小時而知道結果 每次定量完後,假如我要取20ug的蛋白,每次都得取不一樣量的ul數 取量甚至差距到一半 求解?是因為定量出問題 還是蛋白本身DMSO和control就會表現比較多!? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.71.233.11 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1396423089.A.970.html

04/02 18:16, , 1F
利用96孔盤作蛋白質定量請參考台大bct第四章4.2節
04/02 18:16, 1F

04/02 18:17, , 2F
加入呈色劑後若時間拉的太長或間隔不一會造成定量誤差
04/02 18:17, 2F

04/02 21:37, , 3F
謝謝你喔
04/02 21:37, 3F

04/07 13:41, , 4F
擬定量的方法有問題
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04/07 21:41, , 5F
請問怡嚇是我的步驟有問題還是手有問題,謝謝你喔
04/07 21:41, 5F

04/07 23:33, , 6F
有點看不懂... 不過如果你的實驗組加的藥會讓細胞死亡
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04/07 23:33, , 7F
蛋白質濃度相對於control/DMSO組別低是正常現象
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04/07 23:34, , 8F
因為細胞加了要長的就比較少&比較不健康要死不活
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04/07 23:34, , 9F
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04/07 23:35, , 10F
但定量要是準的話, 同樣取20ug蛋白下去染色應該不會差太多
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04/07 23:35, , 11F
除非細胞真的死的太慘,
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04/07 23:36, , 12F
另外在配置跑膠的mixture時,取control由於濃度較加藥組濃
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04/07 23:38, , 13F
要避免pipet時carryover的現象,會造成濃度配出來不準確
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04/08 10:01, , 14F
謝謝,我養的是colo201,加藥下去確實會使細胞死
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04/08 10:02, , 15F
我在收蛋白的時候 也有發現細胞飄起來很多
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04/08 10:03, , 16F
我也有把飄起來的細胞一起收蛋白
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04/08 12:02, , 17F
步驟有問題 你可以寫一下你用的dye名稱嗎
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04/09 09:01, , 18F
4X protein loudong dye 波仕特公司的
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04/09 15:43, , 19F
你自己寫的是Bio-Rad 然後又說是波仕特?
04/09 15:43, 19F

04/09 15:44, , 20F
BTW 是protein loading dye吧 XD
04/09 15:44, 20F

04/10 15:45, , 21F
HAHA,BIO-RAD是定量時用的試劑。
04/10 15:45, 21F

04/10 15:46, , 22F
波仕特是4X loading dye沒錯 一時打太快 哈哈哈
04/10 15:46, 22F

04/30 13:18, , 23F
細胞死太多也會影響到cytoskeleton
04/30 13:18, 23F
文章代碼(AID): #1JExcnbm (Biotech)
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