[求救] miRNA PCR偵測方法

看板Biotech (生命科學)作者kiwishiuan (Shiuan )時間11年前 (2014/04/18 10:20)推噓1(1推 0噓 1→)

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各位前輩好最近在測試一家ribobio的miRNA primer set 不知道有沒有用過他們家產品的前輩們可以給我一些建議他們家的產品是利用有特異性的loop去轉出特定的miRNA，所以是用他們家的RT Primer ，然後RT enzyme哪家都可以，只是有溫度要求，要42度下去跑，其他條件照平常做一般mRNA就可以了（所以在這邊條件下我是用Roche one-step RT enzyme) 溫度就設42度60 min 72度10min, 4度3min) 然後Q-pcr的要求就都比照一般mRNA，只是F,R primer就是他們的primer set附得我的SYBR是ABI的， QPCR機器是ABI 7300, 溫度條件照ribobio建議設 (1X)95 20sec (40X)95°C 10sec, 60°C 20sec, 70°C 10 sec. (在70度這邊因為儀器讀取時間10秒讀不到，所以我加到30sec) Add dissociation curve. Data collection at 70°C. 在以上的條件下，幾乎測不到數據，dissociation curve看起來是一條抖來抖去的下坡... 因為已經買了好幾個miRNA的primer set，所以勢必是要把方法建立起來了不然之前實驗室試用qiagen的，雖然很貴，但還滿好測的ＱＱ請問有沒有用ribobio的前輩們可以指導一下，看是要怎麼改條件會比較好，謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.230.207.49 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1397787648.A.EBD.html