[求救] western blot抗體問題

看板Biotech (生命科學)作者 (大能)時間11年前 (2014/05/15 09:51), 編輯推噓2(2017)
留言19則, 7人參與, 最新討論串1/1
請問各位,這幾次壓片都沒有結果。 抗體是用Santa cruz的,都存放於4度C冰箱 都用PBST配1:1000,壓O/N 可是抗體是學姊留下來的,學姊大概一年前畢業吧 二抗也是用PBST配的,1:5000 每次去壓的結果都頗醜. p27和p21根本沒出現過...只有出現actin 而且actin也不在43這個位置上.... 想詢問一下各位怎麼解決...換抗體嗎還是要用脫脂牛奶去配抗體? 實驗室沒半個學長姐超級囧欸... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.71.233.11 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1400118674.A.924.html

05/15 11:55, , 1F
一般不是都會用blocking去稀釋嗎?
05/15 11:55, 1F

05/15 13:26, , 2F
blocking 用什麼,抗體就用什麼去稀釋
05/15 13:26, 2F

05/15 17:56, , 3F
看起來抗體配製沒甚麼問題。actin的圖和曝光時間可提供一下嗎?
05/15 17:56, 3F

05/15 17:57, , 4F
說不定是protein量太少所導致。
05/15 17:57, 4F

05/15 18:02, , 5F
直接問畢業學姐會比較快,若她壓的訊號都很好,比對你們之間
05/15 18:02, 5F

05/15 18:03, , 6F
作法差異就知道啦!
05/15 18:03, 6F

05/16 00:21, , 7F
連自己try條件都沒try過就上來問,也沒附圖,我們也很囧欸~
05/16 00:21, 7F

05/16 01:50, , 8F
ECL效果不是頂多才半小時? o/n沒差吧
05/16 01:50, 8F

05/16 13:31, , 9F
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05/16 13:32, , 10F
這個是第一次有壓出來的actin
05/16 13:32, 10F

05/16 13:33, , 11F
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05/16 13:34, , 12F
這個是後來壓的,可是不在43那條位置上...
05/16 13:34, 12F

05/16 13:35, , 13F
可是p21和p27都壓不出來欸....
05/16 13:35, 13F

05/16 13:36, , 14F
如果一抗用牛奶稀釋...這樣不是不好保存?
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05/16 14:26, , 15F
看背景感覺訊號像是調過,如果是這樣p27跟p21看不到也合理
05/16 14:26, 15F

05/16 14:27, , 16F
而且你要看p21,p27,應該知道這兩個不見得在所有細胞都明顯
05/16 14:27, 16F

05/16 16:06, , 17F
用牛奶稀釋放1~2個禮拜沒問題,1抗不要用PBST,用PBS milk
05/16 16:06, 17F

05/16 16:06, , 18F
稀釋看看
05/16 16:06, 18F

05/19 11:10, , 19F
好,我今天試看看...因為我怕用牛奶稀釋不能一直reuse
05/19 11:10, 19F
文章代碼(AID): #1JT1sIaa (Biotech)
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