PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] sigma MTT assay kit的溶解步驟

看板Biotech (生命科學)作者 (簡單生活)時間11年前 (2014/05/20 12:35), 11年前編輯推噓1(1推 0噓 10→)
留言11則, 4人參與, 最新討論串1/1
版上各位先進大家好 我要觀察藥物對癌細胞的生存率影響，參考了論文購入了sigma的MTT assay kit kit裡附的溶解液是0.1N HCL in anhydrous isopropanol 我的實驗過程如下： 細胞在96well裡培養24小時後添加藥物(高濃度溶解於DMSO，最終以medium稀釋成1/1000) 藥物添加後培養72小時 加入1/10量的MTT solution再培養4小時 上清液吸掉，加入等量的mtt溶解液，pipetting。 我的問題是我最後加入溶解液後只有加入的瞬間有紫色產生 然後就淡掉變成淺黃色，我拿去振盪(沒差) 或是再放回恆溫箱裡一晚也都沒變色(還乾掉>"<)，顯微鏡看細胞也沒溶掉。 請問是哪個步驗不對了呢？ 請救救我。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 133.1.59.65 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1400560557.A.282.html
→
05/20 21:25, , 1F
試試看處理完藥品以後有用PBS wash過嗎
05/20 21:25, 1F
沒有耶，請問是在哪個步驟要wash呢？
推
05/20 23:44, , 2F
之前我做MTT 加入含MTT之medium培養後 細胞會呈明顯紫色
05/20 23:44, 2F
→
05/20 23:45, , 3F
加上產生之formazan通常是不溶於水相
05/20 23:45, 3F
→
05/20 23:46, , 4F
所以沒產生有可能是細胞已經死亡
05/20 23:46, 4F
但我用顯微鏡觀察時確定控制組是正常的，但全盤都沒有變色…
→
05/21 02:06, , 5F
挑一下語病,"加入1/10量的MTT solution"是未以medium稀釋？
05/21 02:06, 5F
抱歉我沒講清楚，是加培養液的1/10量，100ul加入10ul後pipetting
→
05/21 02:10, , 6F
淺黃色就是MTT未作用的顏色,如果你是正常使用,不需去上清液
05/21 02:10, 6F
→
05/21 02:15, , 7F
就看到發紫了,就算有phenol red也可以觀察到,不必等溶解液
05/21 02:15, 7F
因為我的細胞是附著細胞，我看protocol寫說要吸取再加，所以不吸取也可以嗎？
→
05/21 02:18, , 8F
不過最有問題的是放到incubator會乾掉,如果96wel細胞沒乾掉
05/21 02:18, 8F
→
05/21 02:20, , 9F
這一盤放進去會乾掉,是體積太少還是溶解液真的容易揮發？
05/21 02:20, 9F
我各well是100ul，藥劑添加10~20ul，放隔天是真的揮發乾掉@@ 另外我有查到其他的protocol寫到最後加DMSO，不曉得這和isopropanol的差別是？ 我不知道行不行但我下次用DMSO試試…也謝謝大家的意見 ※ 編輯: yesdora (133.1.59.65), 05/21/2014 15:59:14
→
05/23 22:06, , 10F
應該是isopropanol的問題，因為MTT是氧化還原效應
05/23 22:06, 10F
→
05/23 22:09, , 11F
醇類會和mtt進行氧化還原作用，DMSO只會溶解不會進行反應
05/23 22:09, 11F
‣ 更多 yesdora 的文章
文章代碼(AID): #1JUjkjA2 (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 yesdora 的文章
文章代碼(AID): #1JUjkjA2 (Biotech)