[求救] qRT-PCR基因表現問題
各位版友
小弟我是用qRT-PCR作相對定量的基因表現
做了A、B、C三個targeted gnen與用18s rRNA作Internal control。
以下有幾個問題
(1)因為老師只希望每個基因作一重複
所以有先請我挑選五個不同的SAMPLE作二重複在不同天做
然後要去看批間與批內的變異情形(inter-assay and intra-assay variability)
想請問我要怎樣算才是比較正確的?以個人看?還是以基因看?
http://ppt.cc/VRE8
http://ppt.cc/62Pc
綠色的部分為每個基因所有SAMPLE二重複的MEAN SD CV
紅色的部分為每個SMAPLE二重複的MEAN SD CV
最後橘底的為那一盤上所有基因每個SAMPLE的MEAN SD CV
不太知道哪個是對的?還是全錯了...?
(2)因為是做相對定量要用2^-△△Ct作分析
但是我的實驗只有一個時間點且都是CASE沒有CONTROL
只能算出各個SAMPLE的每個基因的△Ct(A、B、C基因CT-18S CT)
沒有一個原始點可以算△△Ct，所以我之後可以直接用每個基因△Ct直接做分析嗎?
還是也可以用2^-△△Ct作分析△△Ct這部分就帶入△Ct那樣?
麻煩有經驗的大大解惑了! 謝謝!!!
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