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[求救] 粒線體難以觀察

看板Biotech (生命科學)作者 (RabiCat)時間11年前 (2014/05/25 18:17), 編輯推噓1(1推 0噓 20→)
留言21則, 3人參與, 最新討論串1/1
各位前輩好，第一次在這邊發文，若有冒犯請多多包涵 小弟目前實驗要將有綠螢光蛋白(GFP)標定的粒線體注射到SD Rat的脊椎腔(spinal cord) 與坐骨神經(sciatic nerve)中觀察。老鼠犧牲後包埋切片，用螢光抗體針對GFP染色。 目前困擾的地方是由於粒線體實在太小，無法分辨說哪個部分確實是注射的粒線體；此 外顯微鏡最高也只能放大400倍；另外一開始使用綠螢光二抗去觀察粒線體，結果發現 神經組織中也會自己發出綠光，所以換了紅螢光二抗觀察，但結果跟使用綠色螢光二抗 效果差不多，檢體上面都是一點一點的螢光(星光閃閃的樣子)。 目前想說是否在注射粒線體前用MitoTracer標定，但仔細想想原本的粒線體已經 有GFP了，再標定感覺很多餘。此外我待的實驗室也沒人用過MitoTracer。 查了biotech版上也沒有查到類似的問題，故上來提問，懇請賜教，謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.46.177.13 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1401013025.A.DC2.html
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05/25 20:25, , 1F
Confocal??
05/25 20:25, 1F
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05/26 00:12, , 2F
換二抗也有? 一抗專一性不夠?
05/26 00:12, 2F
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05/26 10:51, , 3F
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05/26 10:53, , 4F
http://goo.gl/utTCdx 而顯微鏡是使用一般光學顯微鏡
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05/26 10:53, , 5F
型號是 Olympus BX40
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05/27 11:18, , 6F
我的意思是 用confocal去拍會比較清楚
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05/27 20:40, , 7F
confocal在我的實驗室是公用儀器,使用的話要一個月前預約
05/27 20:40, 7F
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05/27 20:41, , 8F
使用上會比較不方便 故想找比較簡便的方法 畢竟有很多檢體
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05/27 20:42, , 9F
要拍照
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05/28 11:12, , 10F
我有個疑問 為什麼你一開始用GFP標定粒線體
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05/28 11:15, , 11F
後來又要用抗體偵測GFP GFP本身就會發光吧 感覺怪怪的
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05/28 11:18, , 12F
換個不會發光的Tag是不是比較好??
05/28 11:18, 12F
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05/28 11:46, , 13F
有試過切片後直接拍嗎??
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05/29 00:14, , 14F
首先,標定的粒線體是跟合作的實驗室拿的,有紅光綠光兩種;
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接著切片後直接觀察也有做過,但發現組織本身就會發綠光.目
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05/29 00:20, , 16F
前打算換成紅光粒線體或染BrdU標定看看.
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05/29 09:12, , 17F
我認為Confocal還是預約比較好 找有經驗的人幫你會比較快
05/29 09:12, 17F
推
05/29 09:16, , 18F
用ㄧ般的螢光顯微鏡拍很容易因為螢光太強而干擾實驗
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05/29 09:18, , 19F
在預約到之前 你可以試試你說的那些
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05/29 10:15, , 20F
謝謝前輩的建議 我會先試試看前輩講的方法,如果有進展再
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來推文
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