[求救] QPCR擴增曲線的Ct值不符合標準品的濃度
大家好，我的實驗是要用QPCR作環境中細菌的定量分析
使用的reagents是Roche Master 480，probe是TaqMan probe
使用標準品檢測擴增曲線的配置濃度為10^7~10^0
前幾次做實驗的時候都沒有什麼太大的問題
後來上機的時候都發現在10^5與10^4的Ct值很相近，
10^5Ct是24的話10^4就會是25
後來與廠商討論之後，
他們建議我固定每一次標準品dilution的vortex及spin down的時間
並且增加稀釋的體積!
後來我的操作流程是固定vortex五秒，spin down十秒
取10 microliter稀釋成下一個濃度
後來情況也都沒有改善，但最近在做的時候發現10^4~10^3之間出現上述相同的問題
而10^5~10^4變正常了...
請問大家知道可能是有什麼問題導致這樣的結果嗎?
還是是我pipet操作的問題比較大
感謝大家><"
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