[求救] 關於gel filtration 的UV圖譜問題
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
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請教各位大大
目前我純化的蛋白是Bacillus的sigma蛋白 (總共養4L菌液)
破菌後是存在 inclusion body (破菌後有去跑膠確認蛋白的確有被大量表現)
我大量表現破菌後
以6M Gu-HCl denature 然後再refolding
以40% 硫胺沉澱 離心後取pellet(上清液有經SDS-PAGE跑交確認無蛋白)
最後用FPLC跑superdex 200
總共有1根peak 於是我蒐集那根peak對應的sample 去跑SDS-PAGE
但是居然沒有跑出蛋白
我想請問 是沒有分離成功嗎?
如果沒有成功 為什麼又會跑出那根peak?
我有留一些injection的sample去跑膠確認 要injection的sample的確存在我的蛋白
找不出為何我的蛋白消失了 QQ
想請問各位 拜託了
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