[問題] western blot 跑膠疑問

看板Biotech (生命科學)作者 (海綿飽涵 吃不飽)時間11年前 (2014/08/11 15:22), 編輯推噓5(507)
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最近開始做western遇到很多小疑問 因為新的實驗室學長說的方法跟我以往做的方法有所差異 所以想問問大家學長說的是對的嗎? 1. 蛋白收完(溶於sample buffer中)只要在第一次使用時加熱 之後跑膠前就不用在加熱了 因為SB中有某些物質可以使蛋白維持一級結構 2. 為了防止蛋白在load入well後漂走所以一開始電壓要開大一點 學長都是 上膠 200V 下膠 100V 請大家為我解答一下 感恩~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.95.154 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1407741770.A.E6D.html

08/11 15:32, , 1F
1.看配方2.我的經驗是相反,200V跑stacking不怕沒對齊?
08/11 15:32, 1F

08/11 16:13, , 2F
2.相反+1, 到resolving下膠時才能加速...
08/11 16:13, 2F

08/11 16:14, , 3F
1.的話是SDS會附在蛋白上
08/11 16:14, 3F

08/11 17:16, , 4F
1.可參考你們的protein marker使用說明,為什麼-20拿出來
08/11 17:16, 4F

08/11 17:20, , 5F
要先熱一下;2.protein會飄走,是他的sample buffer配方有誤
08/11 17:20, 5F

08/11 19:57, , 6F
1應該是指DTT 但是這東西會慢慢被空氣degrade
08/11 19:57, 6F

08/11 20:51, , 7F
同1f
08/11 20:51, 7F

08/12 09:34, , 8F
Protein marker上註明不需再加熱……
08/12 09:34, 8F

08/12 15:37, , 9F
2相反
08/12 15:37, 9F

08/12 20:37, , 10F
2相反
08/12 20:37, 10F

08/19 10:30, , 11F
2相反+1
08/19 10:30, 11F

08/27 12:24, , 12F
2相反+1
08/27 12:24, 12F
文章代碼(AID): #1Jw6zAvj (Biotech)
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