[求救] SDS PAGE 鹿角魔咒.....

看板Biotech (生命科學)作者albee1992822 (albee)時間11年前 (2014/08/16 15:25)推噓3(3推 0噓 3→)

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如標題! (文長慎入!!!) 我在做大腸桿菌表現Agouti 培養至OD=0.6~0.8加入IPTG刺激三小時每一小時收一次 pellet加入1X dye打破後進行跑膠(15%)確認其表現 http://ppt.cc/Nrn4 如上圖確認表現後進行粗分將所有表現後菌液離心 pellet加入Lysis Buffer打破(0.03g/ml) in ice 1hr 離心後sup保留 pellet加入0.3M Urea Wash Buffer 以均質器研磨10下離心後sup保留 pellet加入0.3M Urea Wash Buffer 以均質器研磨10下離心後sup保留 pellet加入4M Urea Wash Buffer(無Trition X-100) 以均質器研磨10下離心後sup保留 pellet加入4M Urea Wash Buffer 以均質器研磨10下靜置30min 離心後sup保留 pellet加入8M Urea Wash Buffer 以均質器研磨10下之後進行跑膠(15%)就開始見鬼了... http://ppt.cc/P8xn 上圖為最嚴重的時期所有東西都看不見只看見鹿角 http://ppt.cc/Hrt2 上圖是輕微鹿角... 我有拍下跑膠過程http://ppt.cc/s5Gt 看起來一進入下膠就開始長鹿角因為鹿角關係一直無法進行細分卡在這裡許久溶液配方 Lysis Buffer 50mM Tris.cl pH7.5 10% Glycerol 10mM Trition X-100 Urea Wash Buffer 100mM Tris.cl pH7.0 5mM EDTA 5mM DTT 2% Trition X-100 0.3,4,8M Urea 之後老師有下來幫我找問題因為他也從來沒看過先排除膠的問題(因為實驗室其他同學跑膠完全沒異狀) 我們懷疑是Trition X-100的問題因為在沒有Trition X-100 Urea Wash Buffer步驟並沒有鹿角換了兩個牌子還是有一樣的問題之後我就先去做別的實驗在完全沒有Trition X-100的實驗中鹿角又出現了... 我是不是跟SDS PAGE 不合啊!!! 文長...謝謝各位的耐心觀看不知道各位有沒有碰過鹿角有沒有解決方法 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.124.32.50 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1408173924.A.F58.html