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[求救] 凍MCF10A細胞

看板Biotech (生命科學)作者 (欣承男孩)時間11年前 (2014/09/06 13:38), 編輯推噓8(8推 0噓 11→)
留言19則, 12人參與, 最新討論串1/1
想要詢問有關凍MCF10A細胞的問題 是這樣的 前幾天我把之前我凍的MCF10A細胞從液態氮拿出來解凍 結果隔天發現細胞幾乎飄起來......... 而我之前也有用相同的方法解凍MCF10A細胞(這批不是我凍的) 隔天看細胞生長的狀況很良好 所以想必大概是我凍細胞的過程哪裡出了問題 我凍MCF10細胞的流程如下 細胞用PBS wash後 用trypsin打下來 等待10min左右後 接著用medium(兩倍trpsin量)來終止反應 然後離心(600 rcf 5min) 然後開始配置凍細胞的medium 比例如下 medium:DMSO = 9:1(細胞大約凍1/3 10cm dish的量) 總共是1ml 最後我把凍細胞的管放進漸凍盒 放進-80度冰箱 隔天再把細胞移置液態氮筒中 流程差不多是這樣 結果解凍後細胞都飄起來了 不曉得版上有沒有高手可以解除小弟的困擾 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.121.119 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1409981880.A.331.html
推
09/06 15:29, , 1F
Trypsin太久了，改用FBS:DMSO
09/06 15:29, 1F
推
09/06 18:25, , 2F
加FBS
09/06 18:25, 2F
推
09/06 23:42, , 3F
trypsin 作用太久了，可以試7%DMSO
09/06 23:42, 3F
→
09/07 09:44, , 4F
配DMSO凍液的時候有先讓他放熱完再用嗎??
09/07 09:44, 4F
推
09/08 00:40, , 5F
你沒放-20半小時就直接放進-80?
09/08 00:40, 5F
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09/08 00:42, , 6F
而且要加至少5%的血清
09/08 00:42, 6F
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09/08 12:42, , 7F
有漸凍盒,可以直接放-80
09/08 12:42, 7F
推
09/08 15:16, , 8F
10min 太久囉！！
09/08 15:16, 8F
推
09/08 20:58, , 9F
雖然要看trypsin濃度，但MCF10A本來就需要比較長時
09/08 20:58, 9F
→
09/08 20:58, , 10F
間的trypsinization,10-15min都是正常範圍
09/08 20:58, 10F
推
09/08 21:00, , 11F
建議看一下ATCC的protocol
09/08 21:00, 11F
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09/09 10:40, , 12F
http://ppt.cc/baTl ATCC是15min後加inhibitor
09/09 10:40, 12F
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09/09 10:40, , 13F
照做一次看看吧
09/09 10:40, 13F
推
09/09 15:04, , 14F
DMSO凍液可以放在冰降溫
09/09 15:04, 14F
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09/13 16:09, , 15F
我不會讓trypsin作用到10分鐘耶!!
09/13 16:09, 15F
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09/16 00:03, , 16F
trypsin 還是要看濃度決定時間, 漸凍盒有先回溫到室溫 ?
09/16 00:03, 16F
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09/16 00:05, , 17F
凍細胞的DMSO 7~10% 應該都可以, 但是我都是用含10%的FBS
09/16 00:05, 17F
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09/16 00:06, , 18F
medium 在加 DMSO後,先插冰上預冷,因為DMSO加到medium中
09/16 00:06, 18F
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09/16 00:06, , 19F
會放熱,可能會先把細胞傷害到
09/16 00:06, 19F
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