[求救] gene knockout on E. coli Chromosome

看板Biotech (生命科學)作者 (polomi)時間11年前 (2014/09/07 15:41), 編輯推噓0(004)
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主要是想研究在E. coli上的某個特殊蛋白, 而需要先將選定的E. coli上 Chromosome做knockout的動作, 之後再做point mutation後, 用plasmid 送回去表現, 並做生化相關的實驗觀察變化。 目前主要是卡在第一階段上對E. coli上的knockout上, 以前只有念過相關原理, 但從沒有做過這類的實驗。 我有參考一些資料和一篇論文, http://ppt.cc/pvFb http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10829079 也有找到一些相關的KIT網頁, http://ppt.cc/uEIq http://ppt.cc/auBu 因為我是我們實驗室第一次做這個實驗的方法, 想請問有沒有人有做過相同的基因剃除實驗, 有沒有推薦的KIT組, 或是操作方法的變化, 或是實驗上要注意的細節提醒。 感謝大家了。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.26.186.149 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1410075704.A.8E0.html

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做下去就知道了 細菌比真核好做很多
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09/08 03:29, , 2F
帶抗生素KO的片段PCR後要做挖膠 如直接把產物作clean up
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之後你再轉進E.coli的時候會連原本帶抗生素的質體都轉進去
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抱歉 主要是想請問有沒有願意分享protocol或是推薦的KIT
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文章代碼(AID): #1K30muZW (Biotech)
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