[求救] western blot 一片空白
各位前輩大家好
我是實驗室新手上路
有個問題想問大家
目標是要偵測分子量約78的蛋白
condition如下：
以50-80V runing
以300mA transfer
5%脫脂牛奶 blocking
一抗 1:500 ；GAPDH 1:1000 overnight
PBS wash三次 每次10分鐘
二抗1:5000 40分鐘
ECL壓片 1、3、5分鐘
問題是壓出來的片子 一 片 空 白
感覺就像是不曾壓過片直接沖片一般
我transfer完後有用ponceau S呈色看一下
明明就都有看到band
一抗和二抗也確定都沒加錯 也都是新鮮配的
請大家救救我 我已經壓兩次了 都是一片空白
感謝大家幫我回答問題
我是連GAPDH都沒壓出來
其實我上星期有壓出來一次
但這週要repeat data確一直沒出來
原本以為是二抗重覆使用的問題
但我今天重配了 確還是一片空白
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.142.73.83
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大家都用同一罐ECL 所以應該沒問題
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可是我這次laod 10ul 上次laod 5ul確有出來
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二抗用對 有其他人也有用過
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就是連GAPDH都沒有才怪啊!
※ 編輯: hsinhsien (223.142.73.83), 09/25/2014 22:07:32
※ 編輯: hsinhsien (223.142.73.83), 09/25/2014 22:08:21
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