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[求救] western blot 糊掉

看板Biotech (生命科學)作者 (ㄝ..)時間11年前 (2014/10/06 13:07), 編輯推噓10(10推 0噓 8→)
留言18則, 14人參與, 最新討論串1/1
各位大家好 目前我的western blot遇到了一些問題 想請大家幫麻找出問題點 這是我的圖 http://imgur.com/HyQ71yL
以下是我的實驗步驟 -------------------------------------- 在跑膠時，我是用10%的膠 上膠是60V~80V 下膠是80V~120V transfer是100V 60~90min結束 blocking是用5%牛奶 室溫一小時以上 一抗1:10000 4度C O/N TBST buffer(0.2% tween20) wash 二抗1:10000 室溫一小時 TBST buffer(0.2% tween20) wash 加入 millipore ECL 然後用UVP照膠系統去分析 結果如上面。 我有換過 1.配膠的buffer 2.transfer buffer 可是問題還是一樣 所以目前是猜測transfer的電泳槽哪裡有問題 另如濾紙、海綿、卡夾、電泳槽本身 過去2年來濾紙一直都有回收重複使用都沒問題 但現在甚至只回收一次也會這樣 是哪裡還有問題嗎? 煩請各位幫忙解惑 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.95.236 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1412572024.A.BC9.html
推
10/06 13:08, , 1F
Buffer過熱
10/06 13:08, 1F
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10/06 13:18, , 2F
我是在4度C transfer，60min後都還冷冷地。不過下次會
10/06 13:18, 2F
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10/06 13:19, , 3F
再注意看看
10/06 13:19, 3F
推
10/06 13:28, , 4F
transfer沒綁緊? 兩邊緊了但中間沒貼緊?
10/06 13:28, 4F
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10/06 14:11, , 5F
transfer中間沒有貼緊 有時候版子用久了會有弧度
10/06 14:11, 5F
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10/06 17:43, , 6F
http://ppt.cc/qe_Q <=裡面找看看有沒有類似症頭
10/06 17:43, 6F
推
10/06 20:27, , 7F
ransfer中間沒有貼緊? 或是剛好有氣泡沒注意到?
10/06 20:27, 7F
推
10/06 20:54, , 8F
先確定PAGE有沒有跑好. 每個wells可能要用buffer沖一沖.
10/06 20:54, 8F
推
10/06 23:12, , 9F
transfer的問題
10/06 23:12, 9F
推
10/06 23:58, , 10F
海綿沒有平整?我之前出現這樣發現是海綿沒有平
10/06 23:58, 10F
推
10/07 12:58, , 11F
transfer完可以用ponceau S染看看
10/07 12:58, 11F
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10/09 09:48, , 12F
用的membrance需要先泡methanol處理嗎? 沒泡完全?
10/09 09:48, 12F
推
10/11 03:39, , 13F
看似transfer以前的問題 鑄膠玻璃和齒梳有對嗎
10/11 03:39, 13F
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10/11 03:40, , 14F
也有可能是氣泡
10/11 03:40, 14F
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10/13 00:48, , 15F
transfer沒夾緊+1, 3M paper前後各放兩張吧!!(過來人
10/13 00:48, 15F
推
10/19 05:53, , 16F
去隔壁借別家的transfer用用看吧...
10/19 05:53, 16F
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01/12 12:44, , 17F
謝謝樓上的各位，後來換了卡夾跟海綿就沒有問題了。
01/12 12:44, 17F
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01/12 12:44, , 18F
如果有人有這種問題，可以參考看看!!!
01/12 12:44, 18F
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