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[期刊] 實驗方法討論

看板Biotech (生命科學)作者 (albee)時間11年前 (2014/10/13 13:23), 編輯推噓6(6推 0噓 14→)
留言20則, 3人參與, 最新討論串1/1
期刊名稱 Propionibacterium acnes induces IL-1β secretion via the NLRP3 inflammasome in human monocytes 出版年份 Published in final edited form as: J Invest Dermatol. 2014 February ; 134(2): 381–388. doi:10.1038/jid.2013.309. 文獻網址 http://ppt.cc/xsQC 大致內容如下 以痤瘡桿菌刺激細胞看發炎路徑 確認IL-1β會不會經由NLRP3表現 再看是否由caspase1切割IL-1β使其成熟分泌 文中提到這個發炎路徑還會涉及鉀離子外流 現在小妹我不懂圖4(a)的實驗方法要怎麼做 他為什麼會用western來測,要測的是什麼 小妹資歷不深 還請各位賜教 有打錯的 先說不好意思了... 謝謝大家!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.124.32.50 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1413177837.A.5CB.html
推
10/13 14:05, , 1F
利用「抑制藥」降低active caspase-1的產生
10/13 14:05, 1F
→
10/13 14:09, , 2F
證明P.acnes可以讓caspase-1變成active form
10/13 14:09, 2F
→
10/13 14:10, , 3F
所以lane 4使用抑制劑後，caspase-1的active form變少
10/13 14:10, 3F
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10/13 14:13, , 4F
許多證明signaling pathway的實驗會使用這方法
10/13 14:13, 4F
→
10/13 14:16, , 5F
如果我有說錯的話，還請各位指正。
10/13 14:16, 5F
推
10/13 14:20, , 6F
Result 2: P. acnes -> caspase1-> IL-1B secretion
10/13 14:20, 6F
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10/13 14:20, , 7F
glybenclamide透過抑制ATP-sensitive K+ channels 阻斷
10/13 14:20, 7F
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10/13 14:20, , 8F
caspase1活化, (Lamkanfi et al., 2009b)
10/13 14:20, 8F
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10/13 14:20, , 9F
作者假設 P. acnes -> K+ exfflux -> caspase1-> IL-1B
10/13 14:20, 9F
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10/13 14:21, , 10F
fig.4 發現glybenclamide 抑制細胞內的caspase1活化(a)
10/13 14:21, 10F
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10/13 14:21, , 11F
同時也抑制IL-1Bsecretion(b)
10/13 14:21, 11F
推
10/13 14:26, , 12F
只用1種藥就下結論有點危險 如果剛好是side-effect怎半?
10/13 14:26, 12F
推
10/13 14:41, , 13F
Z-YVAD-FMK是positive control;推文真不方便Orz
10/13 14:41, 13F
推
10/13 14:42, , 14F
fig.4a 由於caspase1的active form需要切下一部份peptide
10/13 14:42, 14F
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10/13 14:42, , 15F
所以分子量會變小 用WB剛剛好~
10/13 14:42, 15F
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10/13 19:37, , 16F
chaunen說的不太對,glybenclamide並不會抑制IL-1b分泌(4b)
10/13 19:37, 16F
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10/13 19:40, , 17F
而是抑制P. acnes->K+ exfflux,所以解釋藥物效果有針對性
10/13 19:40, 17F
推
10/13 20:02, , 18F
我懂了! 所以glybenclamide只會抑制P. acnes造成的IL-1b
10/13 20:02, 18F
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10/13 20:05, , 19F
分泌 並不影響basal的secretion 凸顯K+efflux參與的重要
10/13 20:05, 19F
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10/13 20:06, , 20F
我果然還是太嫩了XD
10/13 20:06, 20F
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