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[求救] Real-time PCR的PCR efficiency~

看板Biotech (生命科學)作者 (因禍得福???)時間11年前 (2014/11/20 19:37), 編輯推噓6(6推 0噓 9→)
留言15則, 8人參與, 最新討論串1/1
想請問大家， 做Relative quantification的real-time PCR前 都會先確認PCR efficiency嗎? 查的文獻說一定要統一PCR efficiency 做出來的數據才有意義.... 可是我們老師認為沒有做的必要， 沒有人在做....問了隔壁研究室的前輩， 也說他們實驗室也沒有人在確認這個的， 請問大家的實驗室也不會確認嗎? 這樣做出來的DATA發表paper的話，會不會有問題呢? 謝謝回答^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 118.155.71.46 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1416483453.A.516.html
推
11/20 22:10, , 1F
很多人都沒有做, 但建議可以測試一下較安心
11/20 22:10, 1F
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11/21 01:01, , 2F
11/21 01:01, 2F
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11/21 01:01, , 3F
一下這篇paper，你就會知道需不需要做了！
11/21 01:01, 3F
推
11/21 08:50, , 4F
你不做要怎麼算之後的data 都當成double per cycle?
11/21 08:50, 4F
推
11/22 23:58, , 5F
投稿時 ，曾經被問過 。
11/22 23:58, 5F
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11/23 14:08, , 6F
的確不少researchers和publications就直接假設是2了…
11/23 14:08, 6F
推
12/01 00:16, , 7F
可以加做一個standard curve就可以確認了
12/01 00:16, 7F
推
12/03 19:17, , 8F
你有幾個gene要測?大於4個的話直接改算相對表現量改變
12/03 19:17, 8F
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12/03 19:18, , 9F
反正你有放control 又有house keeping 多於4個基因還作eff
12/03 19:18, 9F
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12/03 19:18, , 10F
只會殺了自己尤其是(真)standard curve是算copy number的
12/03 19:18, 10F
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12/03 19:20, , 11F
打太快 是改用'進階'相對表現量改變 就是有個對照基本樣品
12/03 19:20, 11F
推
12/04 01:57, , 12F
借這篇問一下 如果用ddCt法做relative quantification的
12/04 01:57, 12F
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12/04 01:57, , 13F
話 需要每盤都有housekeeping gene嗎？sample很多 一盤
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12/04 01:57, , 14F
放不下 每盤都要housekeeping gene的話要做的量一下子多
12/04 01:57, 14F
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12/04 01:57, , 15F
好多
12/04 01:57, 15F
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