[求救] 24 well 怎麼將細胞分勻 ?

看板Biotech (生命科學)作者 (dorisaq2791)時間11年前 (2014/12/07 02:29), 11年前編輯推噓2(2020)
留言22則, 6人參與, 最新討論串1/1
我有爬過一些文,但不甚了解,而且我的問題跟大家似乎不太一樣@ @ 我的問題是將細胞分至24 well 時細胞並不會均勻分布 總是呈現中間較少 旁邊較多的情形 我的作法 將細胞懸浮夜和medium依所需比例混合均勻後放入50cc離心管 以Glass pipet mix均勻 分細胞時也是以GP分 ,每滴3 well 即再度mix 然後就直接送進培養箱了 沒有作其他搖晃 在細胞液體積部分 我是分得很平均的 每個well都很接近 在剛分完時有在顯微鏡下看過,感覺都細胞分佈很平均 不過當細胞貼好,一拿到顯微鏡下就破功了... 中間很稀少,在well邊緣較集中 實驗室學姐說有可能是在滴細胞液時的速度不對 想問大家有沒有什麼想法 ,因為我也不是每次都分的不平均@ @ 想知道除了滴細胞夜速度方面是不是有其他問題 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 118.171.191.42 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1417890579.A.CAB.html ※ 編輯: dorisaq2791 (118.171.191.42), 12/07/2014 02:31:19

12/07 02:41, , 1F
前面怎麼mix都沒差,well會分佈不均跟加入well之前動作無關
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12/07 02:43, , 2F
加入之前mix只影響各well細胞數,之後的搖晃才影響分佈
12/07 02:43, 2F

12/07 16:11, , 3F
加入的時候,先在well中間加少量,等每孔都加完了,再調整
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12/07 16:13, , 4F
每孔的medium量到所的量,再輕輕的敲一敲,讓細胞散開就好
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12/07 22:14, , 5F
最後每well的medium量大約是多少?
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12/07 22:16, , 6F
太少容易分布不均(不過比較容易是擠在中間或某區)
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12/07 22:18, , 7F
可以像樓上說的 先加部分medium在well中再加細胞液
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12/07 22:20, , 8F
最後500ul/well左右 再前後左右輕拍 應該就可以
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12/08 00:57, , 9F
1
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12/08 00:58, , 10F
抱歉我不太會用b版, 我的細胞液總體積是1ml
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12/08 01:00, , 11F
謝謝大家 我會再試試看
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直接滴入well 不要搖 hood裡放個10分鐘等細胞貼
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12/08 21:00, , 13F
ex:1*10^5 cells in 500ul per well 10個well就配11份
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在50ml tube pipette均勻後吸500ul 滴入well
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plate一搖到就GG了
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12/08 21:05, , 16F
另外要注意hood桌面的水平 不然會發現細胞密度呈現梯度
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well越大越明顯 尤其10cm
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12/08 21:11, , 18F
中間少旁邊多應該是medium太少 24well要400ul以上較保險
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12/08 21:12, , 19F
搖搖苦手經驗留
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12/08 21:15, , 20F
原po都說總體積1ml了,顯然不是medium太少
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12/24 03:49, , 21F
我以前也遇過,你可以每次入well前先用tip mix均勻 我是
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12/24 03:49, , 22F
總體積超過30mL 我會分兩館
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文章代碼(AID): #1KWqiJoh (Biotech)
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