[求救] PCR negative control鬼打牆

看板Biotech (生命科學)作者 (Pan)時間10年前 (2015/01/16 10:03), 10年前編輯推噓4(407)
留言11則, 7人參與, 最新討論串1/1
各位大大好 前天我做PCR的時候,發現negative control有band出現 所以我為了想知道是哪邊出的問題,昨天就測試了幾個negative control 但是結果卻讓我怎麼想都想不通 圖片如下: http://ppt.cc/YPVH PCR做法我是將bf和dNTP跟酵素先做pre-mix,再分到其他管 水和引子是一管一管加 一個月前我測試primer condition的時候 用A引子做的negative control跟第二組一樣 但是同樣的reagent用其他引子做negative control就沒問題 這個月做的時候,水已經換新的了(跟一個月前的水不同) 也是前幾天做PCR,用別的引子當negative control就OK 到了前天,用A引子做negative control就不行 但是如果是稀釋的A引子汙染的話 第四組用新的水做negative control就又OK.... 而且第一、二組的band還長得不一樣 我真的搞不清是哪裡出問題了.... 請大家救救我~~~謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.92.108 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1421373833.A.964.html

01/16 10:43, , 1F
就圖中的1,4,我會說水有污染,因為4是正常的,
01/16 10:43, 1F

01/16 10:45, , 2F
不妨多作new A primer+new ddH2O,也要是沒有band。
01/16 10:45, 2F

01/16 10:49, , 3F
圖3,沒有band,只能說沒有primer可以夾出來的東西,
01/16 10:49, 3F

01/16 10:50, , 4F
不妨多作old B primer+new ddH2O,也要是沒有band。
01/16 10:50, 4F

01/16 12:17, , 5F
同一樓 做一個new primer+new H2O
01/16 12:17, 5F

01/16 13:04, , 6F
(1,2)都有東西,所以水有問題,(3)不同primer效率不同難比較
01/16 13:04, 6F

01/16 13:05, , 7F
我覺得標題講internal control好像怪怪的
01/16 13:05, 7F

01/16 13:19, , 8F
應該是negative control吧
01/16 13:19, 8F

01/16 13:41, , 9F
害我看到internal control就覺得是RT, 進來才發現不是...
01/16 13:41, 9F
Sorry打錯,已經改好了 謝謝大家的建議,我會再試試看 ※ 編輯: jiuen217 (163.25.92.108), 01/16/2015 13:44:56

01/17 17:26, , 10F
我好奇你的樣本是原核or真核?
01/17 17:26, 10F

01/26 10:17, , 11F
真核,是human的
01/26 10:17, 11F
文章代碼(AID): #1Kk769ba (Biotech)
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