[求救] Insoluble蛋白純化urea回溶不佳

看板Biotech (生命科學)作者lyu0001 (鄉民1號)時間10年前 (2015/01/23 19:57)推噓5(5推 0噓 2→)

留言7則, 3人參與討論串1/1

純化一個不溶性蛋白，破菌後溶於lysis buffer，離心後，再把pellet回溶於含6M urea的lysis buffer，結果發現回溶於urea的蛋白只有20～30％。Orz 不確定是不是導致蛋白質純化量很少的主要原因。請問怎麼增加不溶性蛋白的溶解度？有建議的方法嗎？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 123.192.204.190 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1422014255.A.EF8.html

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jabari

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Ianthegood

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一般條件是用8M urea，如果有雙硫鍵，要加還原劑打斷-s-s- 可能先試試看8M urea + DTT condition ※ 編輯: lyu0001 (123.192.204.190), 01/24/2015 11:28:38

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Ianthegood

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Ianthegood

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發現問題應該出在elution pH要在5.6 or 4.5 pH7.4可能不適用... Urea 6M改成8M 應該可以增加溶解度更新：溶解度是改善了，但是protein binding還是很弱 Orz flow through很多沒有binding上去 ※ 編輯: lyu0001 (123.192.204.190), 01/27/2015 18:59:01

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jabari

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Ianthegood

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kg9101266

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