PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] [生化] 一題台大生化實驗題組

看板Biotech (生命科學)作者 (*劍影*)時間10年前 (2015/02/01 21:40), 編輯推噓13(13推 0噓 29→)
留言42則, 12人參與, 最新討論串1/1
大家好， 最近寫到一題台大生化的實驗題題組 有點困惑， 問了周遭的朋友幾乎都不會 所以來版上請教一下各位高手們 題目在此 http://ppt.cc/7fDb 有人可以跟我解釋這個實驗的進行大約是在做什麼嗎? 感激不盡^ ^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.230.97.239 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1422798048.A.F52.html
推
02/01 22:31, , 1F
把cDNA(insert)放入vector後做cloning,篩出正確的colony
02/01 22:31, 1F
→
02/01 22:32, , 2F
再用restriction enzyme做double digestion check
02/01 22:32, 2F
推
02/01 22:39, , 3F
CBE
02/01 22:39, 3F
→
02/01 23:45, , 4F
感謝> < 但想知道為什麼48是E?
02/01 23:45, 4F
→
02/02 07:26, , 5F
應該lane"4"才是double digestion, 切出1.5kb就是cDNA
02/02 07:26, 5F
→
02/02 07:26, , 6F
錯字不少
02/02 07:26, 6F
→
02/02 10:59, , 7F
為什麼切一刀會有6k跟3k啊
02/02 10:59, 7F
→
02/02 11:04, , 8F
single enzyme 和切一刀有點距離
02/02 11:04, 8F
推
02/02 11:12, , 9F
好恐怖的英文~抖
02/02 11:12, 9F
→
02/02 11:40, , 10F
我也想不出單純NdaI會切出6k跟3k
02/02 11:40, 10F
→
02/02 13:26, , 11F
如果ndei>1, 那ndei+bamhi應該要有3+片段吧
02/02 13:26, 11F
推
02/02 17:38, , 12F
應該是Nde I 在Lane3切位上不只一個，才會有小片段吧
02/02 17:38, 12F
→
02/02 17:52, , 13F
對啊 啊lane4怎麼沒有多出來的片段
02/02 17:52, 13F
→
02/02 18:28, , 14F
如果Lane3 NdeI切為不只一個,整個是9k也跟Lane1,3不一致
02/02 18:28, 14F
→
02/02 18:31, , 15F
更何況考cloning,選用的RE竟然用非單一site,這是錯誤學習
02/02 18:31, 15F
推
02/02 22:19, , 16F
CBE
02/02 22:19, 16F
推
02/02 22:27, , 17F
這英文...題組是誰出的阿= = Lan2我還猜想最高的是gDNA
02/02 22:27, 17F
→
02/02 22:28, , 18F
contamination+ nick form, supercoiled form XDDD
02/02 22:28, 18F
→
02/02 22:29, , 19F
但Lane3的 3k band...
02/02 22:29, 19F
→
02/02 22:31, , 20F
我曉得了 cDNA上有BamHI site而且還在正中間 所以答案應
02/02 22:31, 20F
→
02/02 22:32, , 21F
該是CBA(?) 基本上MCS上的cut sites不可能出現在vector
02/02 22:32, 21F
→
02/02 22:35, , 22F
cDNA上有無BamHI都無法解釋Lane3 NdeI那3kbp的由來
02/02 22:35, 22F
→
02/02 22:35, , 23F
但BamHI sticky end是可以和一些RE的cut site合的 所以
02/02 22:35, 23F
推
02/02 22:36, , 24F
概念上合理(?) 有誤可以來討論
02/02 22:36, 24F
→
02/02 22:38, , 25F
因為cDNA長度3k (所以lane3的最上面是全長9k)
02/02 22:38, 25F
→
02/02 22:39, , 26F
而Lane4的1.5k位置則是有兩段產物... 不過這變成智力測
02/02 22:39, 26F
→
02/02 22:39, , 27F
驗了...
02/02 22:39, 27F
→
02/02 22:46, , 28F
不管Lane4的1.5k有幾段產物,你還是沒解決Lane3的3k怎麼來
02/02 22:46, 28F
→
02/02 22:47, , 29F
至少你應該先假設有兩個NdeI吧....雖然這樣也難解釋其他的
02/02 22:47, 29F
→
02/02 22:58, , 30F
3k 是cDNA全長 cDNA正中間有個BamHI cut site 所以lane3
02/02 22:58, 30F
→
02/02 22:59, , 31F
阿 抱歉 謝謝樓上提醒 我忽略應該是有2個NdeI在MCS兩端
02/02 22:59, 31F
→
02/02 23:00, , 32F
(在我的天馬行空假設下)
02/02 23:00, 32F
推
02/02 23:05, , 33F
阿 我錯了 即使有兩個NdeI BamHI在cDNA多一個 lane3還是
02/02 23:05, 33F
→
02/02 23:05, , 34F
不合理...
02/02 23:05, 34F
推
02/02 23:08, , 35F
先別說這些... lane 2有3條 ..莊老師有沒教過怎麼辦純化@@
02/02 23:08, 35F
→
02/02 23:09, , 36F
你要說lane3的3K是super coil我也認了 Lane2那啥? 斷光光?
02/02 23:09, 36F
→
02/02 23:12, , 37F
其實Lane2以全長7k來說,supercoil最低出現在近5k是合理的
02/02 23:12, 37F
推
02/02 23:13, , 38F
這樣也算合理啦.. 不過lane3這太威了 QwQ
02/02 23:13, 38F
推
02/02 23:14, , 39F
agree with blence
02/02 23:14, 39F
推
02/02 23:38, , 40F
應該打電話去問...搞不好這題送分(?)
02/02 23:38, 40F
→
02/03 22:56, , 41F
感謝大家的忙^ ^
02/03 22:56, 41F
推
02/06 13:35, , 42F
英文真的頗呵......
02/06 13:35, 42F
‣ 更多 dcpick2001 的文章
文章代碼(AID): #1KpYpWzI (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 dcpick2001 的文章
文章代碼(AID): #1KpYpWzI (Biotech)