[求救] 請問用trypsin是否合適將貼附的PBMC分離

看板Biotech (生命科學)作者 (嗄)時間10年前 (2015/03/03 18:11), 編輯推噓4(407)
留言11則, 5人參與, 最新討論串1/1
為了要將PBMC從Corning plastic well打下來 以進行後續的RNA抽取步驟(使用Roche RNA purification kit) PBMC貼附後1天便加入trypsin(有warm到37度) 但等了5min後細胞還是有一半都還貼附在盤子上 會不會是因為我的細胞數量太多的關係而trypsin的量不夠? (我的PBMC量為1X107在6cm dish trypsin加0.5ml) 另外由於PBMC型態的關係 很難分辨到底是detach的圓圓小細胞還是原本就是圓圓但是是貼附的PBMC 新手發問 謝謝各位 <_ _> -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.126.72.183 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1425377518.A.FCF.html

03/03 18:26, , 1F
你只是要抽RNA的話.. 用刮刀刮一刮加RNALater直接收了
03/03 18:26, 1F

03/03 19:06, , 2F
主要是所使用的RNA isolation kit的關係...之後步驟是加l
03/03 19:06, 2F

03/03 19:07, , 3F
lysis buffer+PBS所以會需要先將細胞打下來
03/03 19:07, 3F

03/03 19:59, , 4F
我的做法是︰把培養液吸乾,加PBS洗一下細胞,吸乾
03/03 19:59, 4F

03/03 20:00, , 5F
再加一些PBS,用刮刀把細胞刮下來,收在eppendroff,
03/03 20:00, 5F

03/03 20:01, , 6F
再加lysis buffer+PBS 到kit說明書上的量~~~
03/03 20:01, 6F

03/03 20:03, , 7F
然後就開始跑流程~~~
03/03 20:03, 7F

03/03 20:53, , 8F
喔喔謝謝!這樣的作法是因為PBMC很難用trypsin打下來嗎?
03/03 20:53, 8F

03/06 06:54, , 9F
刮刀+1 另外您的trypsin 濃度多少? 通常細胞說明書
03/06 06:54, 9F

03/06 06:54, , 10F
會有建議濃度
03/06 06:54, 10F

03/13 12:30, , 11F
PBMC照理說不會那麼貼? 要不要用用看沒coating的plate
03/13 12:30, 11F
文章代碼(AID): #1KzOZk_F (Biotech)
文章代碼(AID): #1KzOZk_F (Biotech)