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[求救] 永遠跑不漂亮的marker

看板Biotech (生命科學)作者 (jaren229)時間10年前 (2015/03/03 19:13), 10年前編輯推噓6(6推 0噓 11→)
留言17則, 9人參與, 最新討論串1/1
大家好~打給後 我是鳳梨田中的小魯妹 有件事困擾我很久(三個月) 目前擔任助理的我 幫老闆跑colony PCR的膠 marker 總是跑得很奇怪 之前的實驗室從來沒遇過這種怪事 以下是我的實驗條件 塗盤-->挑單一菌落-->Colony PCR(Product size: 0.8kb) Gel %: 1%(將別人做Gel用剩留在錐形瓶中的，重新微波做新的一片 我們實驗室有夠省) buffer：1X TBE 100V；25min 結果跑出來變這樣 (同樣的情況發生很多次，但有時候不會) http://ppt.cc/eZeD lane2,9是marker 其他是sample marker只有一罐其他人用都沒問題 我實在是找不出問題在哪 每一次跑都心驚膽跳 跑成這樣根本不能當data用 請各位大大指點指點 順手回一回 救救小魯妹 祝大家實驗順利~~ 補充說明 lane2的marker 500k 以下都跑不出來，莫名其妙的消失了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.123.85.94 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1425381191.A.B1C.html
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03/03 19:18, , 1F
個人覺得問題是膠...
03/03 19:18, 1F
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03/03 20:50, , 2F
Marker 是 commercial ready to use 的還是買 stock 自
03/03 20:50, 2F
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03/03 20:50, , 3F
己配的？
03/03 20:50, 3F
是commercial的
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03/03 23:02, , 4F
sample loading少一點，marker像是被sample擠壓
03/03 23:02, 4F
sample load 12 lamda marker load 3 lamda
推
03/03 23:03, , 5F
TBE不是0.5X? 有沒有戳到底啊?
03/03 23:03, 5F
我們家都是用一倍的，學長姐學弟妹用了都OK
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03/03 23:12, , 6F
lane 9看似在loading時把well戳出小洞才在中間拖一條
03/03 23:12, 6F
我很小心應該不太可能
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03/03 23:31, , 7F
agarose膠也會有sample被擠壓變形的問題嗎??
03/03 23:31, 7F
※ 編輯: jaren229 (223.138.152.49), 03/04/2015 07:51:32
推
03/04 07:55, , 8F
遇過 似忽是loading dye配方不同 marker和sample之間空一
03/04 07:55, 8F
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03/04 07:55, , 9F
格
03/04 07:55, 9F
推
03/06 00:10, , 10F
buffer倒太多gel跑到浮起來了，稍微蓋住膠面即可，妳如
03/06 00:10, 10F
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03/06 00:10, , 11F
果跑1hr說不一定1kb的band也不見了
03/06 00:10, 11F
推
03/06 00:17, , 12F
smear應該是熔膠不完全或倒膠時太冷已經有結塊的關係，
03/06 00:17, 12F
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03/06 00:17, , 13F
最後如過跑100的ladder膠的濃度可以在提高點，不然100-
03/06 00:17, 13F
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03/06 00:17, , 14F
1kb的band跑不開不漂亮
03/06 00:17, 14F
推
03/07 15:59, , 15F
微波重複使用很常見阿 可能是製膠槽或凝膠有雜質
03/07 15:59, 15F
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03/16 08:05, , 16F
膠的問題,沒有凝好~
03/16 08:05, 16F
推
05/04 19:15, , 17F
看起來是膠的問題 要小心loading時不要搓破well
05/04 19:15, 17F
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