[求救] BCA蛋白質定量

看板Biotech (生命科學)作者 (B勒)時間10年前 (2015/04/03 22:45), 編輯推噓4(406)
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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等)之分讓, 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作 簽署材料分讓協議(MTA),否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 想請問 我欲利用強鹼(10N NaOH沸水浴30 min)萃取我樣品中的蛋白質,萃取完後paper說要以HCl中和,我用滴定的方式滴我的樣品,但因為使用的是強酸中和,一不小心就會爆衝,得到的ph會變成6-9之間,想請問想請問不同ph對BCA assay測量可溶性蛋白的影響,如果可以我還真希望可以以強鹼來直接測BCA吸光值... 還有一個問題~就是因為我的是固態樣品,強鹼溶解過後還是有很多固體殘留,如果我在萃取之後拿強鹼蛋白溶液去離心,水溶性蛋白會不會被離掉阿?如果以強酸進行中和後,會被離掉嗎? 請各位大大幫幫我 沒連假...趕實驗中... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.121.156.125 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1428072358.A.452.html

04/04 14:25, , 1F
BCA定量的是鹼性環境中作用,可以去查查看說明書會受
04/04 14:25, 1F

04/04 14:26, , 2F
那些物質影響定量結果。 離心的話應該是沒問題
04/04 14:26, 2F

04/04 14:28, , 3F
收細胞後定量前也會離心再取上清夜去定量。
04/04 14:28, 3F

04/04 14:28, , 4F
以上有錯請大家指正,謝謝!! 祝你實驗順利!!
04/04 14:28, 4F

04/05 23:39, , 5F
生物中的酸鹼中和,從來都不是以高濃度開始。你要的是稀釋的
04/05 23:39, 5F

04/05 23:41, , 6F
HCl 來達到中和的目的。如果該 paper 没寫清楚作法,問作者
04/05 23:41, 6F

04/05 23:45, , 7F
另外,以 10N NaOH 來處理蛋白……這是什麼 protocol?
04/05 23:45, 7F

04/08 13:22, , 8F
同樓上 想想瞭解10N NaOH萃取蛋白的protocol
04/08 13:22, 8F

04/09 15:31, , 9F
trouble shooting 那邊有寫強鹼強酸會減緩變色 thermo的
04/09 15:31, 9F

04/09 15:36, , 10F
不過也沒有寫多少叫強 我自己是常用 pH=8.8 的NP40
04/09 15:36, 10F
文章代碼(AID): #1L7gUcHI (Biotech)
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