[求救] Bisulfite PCR
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
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最近在做Bisulfite PCR
目的是處理過Bisulfite的gDNA要用PCR放大 把片段純化做TA+sequencing
目前是抽完gDNA 260/280有1.9 260/230有1.8
拿500ng gDNA做置換!
我是用EpiTect Fast bisulfite conversion kit(Qiagen)
Q:
1. 請問我該取多少ng的biDNA去跑PCR
以及我該用Hotstart Taq做嗎?
2. Bisulfite-PCR 的primer設計有推薦的網站嗎?(目前是用Methprimer..)
上面那設計出的primer有做過一輪 完全沒band...
3. primer的長度,Tm值 有比較建議的嗎?
4. PCR 的protocol有針對biDNA比較好的溫度時間嗎?
ps.我們實驗室沒有學長姐會做這實驗 老師也只叫我做 沒轍阿!!!
謝謝!!!!!!!!!!
(被苦惱已久的小小研究生敬上!)
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